背景^[1-3]

SFXN4抗體是一種IgG1κ小鼠單克隆SFXN4抗體（也稱為SFXN4抗體、ABL原癌基因1抗體或非受體酪氨酸激酶抗體），可通過(guò)WB、IP、IF、IHC(P)和ELISA檢測(cè)小鼠、大鼠和人類的SFXN4蛋白。SFXN4抗體（8E9）既可以作為非共軛抗SFXN4抗體，也可以作為多種共軛形式的抗SFXN4抗體，包括瓊脂糖、HRP、PE、FITC和多種共軛物。

SFXN4抗體

SFXN4抗體使用步驟（Western Blot）：

1.樣本制備

1）融解RIPA裂解液（RIPA裂解液-細(xì)胞/組織裂解液緩沖液），混勻。

2）貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。

3）充分裂解后，10000-14000g離心3-5min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

2.蛋白電泳

1）取出預(yù)制膠，將預(yù)制膠固定在電泳槽中，內(nèi)槽加滿tris-glycine電泳緩沖液。

2）在室溫或不超過(guò)37℃的水浴中溶解5XSDS-PAGE上樣緩沖液。水浴溶解后立即室溫存放。

3）混合蛋白樣品和5XSDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。

4）100℃或沸水浴加熱3-5min，以充分變性蛋白，之后冷卻至室溫備用。

5）上樣蛋白，并在1個(gè)孔中上樣蛋白marker，蓋上電泳槽蓋，打開(kāi)電源，電泳至藍(lán)色染料到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳。

6）電泳后取出膠板，用刀在側(cè)邊硅膠處，沿著兩片玻璃縫隙切開(kāi)硅膠，即可打開(kāi)玻璃板；取膠時(shí)。

3.轉(zhuǎn)膜與封閉

1）將膠浸于預(yù)冷的轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡5min。

2）依據(jù)膠的大小剪取膜和濾紙6片，放入預(yù)冷的轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡10min，如用PVDF膜，需參照說(shuō)明書(shū)，先用純甲醇浸泡1-2min，再孵育于預(yù)冷的轉(zhuǎn)膜緩沖液中。

3）裝配轉(zhuǎn)移三明治：海綿/3層濾紙/膠/膜/3層濾紙/海綿，每層放好后，用試管趕盡氣泡。

4）將轉(zhuǎn)移槽置于冰浴中，放入三明治，膜靠近陽(yáng)極，膠靠近陰極，加入轉(zhuǎn)移緩沖液，插上電極，100V，1h（電流約為0.3A）。

5）轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，切斷電源，取出膜。

6）將膜浸沒(méi)在5mL麗春紅染色液中，置于軌道搖床上室溫染色5~10min或更長(zhǎng)，直待膜上顯示出蛋白條帶。

7）清洗：取出膜，用蒸餾水，PBS或者其他適當(dāng)溶液沖洗至背景清晰后拍照，大概沖洗2~3次，每次5min。

8）脫色：將膜放到0.1N NaOH溶液漂洗5min；倒去洗脫液，再重復(fù)一次。

9）清洗：再用蒸餾水清洗膜2~3次，每次5min。

10）將膜置于25mL封閉緩沖液中，在室溫下孵育1小時(shí)。

11）用5mL TBST洗滌三次，每次15min。

4.抗體孵育與檢測(cè)

1）將膜和一抗（SFXN4抗體按照產(chǎn)品應(yīng)用推薦稀釋度）置于10mL一抗稀釋緩沖液中在4℃下孵育過(guò)夜并不時(shí)輕輕晃動(dòng)。

2）用5mL TBST洗滌三次，每次15min以去除殘留的一抗(SFXN4抗體)。

3）將膜和二抗（按照產(chǎn)品應(yīng)用推薦稀釋度）置于10mL封閉緩沖液中孵育1-2小時(shí)并不時(shí)輕輕晃動(dòng)。

4）用5mL TBST洗滌三次，每次15min。

5）最后一次洗膜的同時(shí)，按照ECL超敏試劑盒說(shuō)明書(shū)，新鮮配制發(fā)光工作液。

6）用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液。將膜完全浸入發(fā)光工作液中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3min，準(zhǔn)備立即壓片曝光。但勿洗去發(fā)光液。

7）顯影曝光。

應(yīng)用^[4][5]

SFXN4抗體可以用于整合多種分子表型QTL解析eQTL的形成機(jī)制及鑒定豬肉質(zhì)性狀候選基因的功能突變

研究對(duì)189頭杜洛克與陸川豬雜交F1代個(gè)體背最長(zhǎng)肌組織進(jìn)行了eQTL分析,并聯(lián)合基因與性狀間的相關(guān)分析及GWAS分析,對(duì)影響豬肉質(zhì)性狀功能基因或突變進(jìn)行了深入挖掘;進(jìn)一步結(jié)合6種MolQTL分析（molecular quantitative trait loci,MolQTL）深入探究了cis-eQTL的形成機(jī)制并鑒定了相關(guān)基因功能突變。本研究取得的主要結(jié)果如下:（1）基于RNAseq和芯片數(shù)據(jù),本研究鑒定到了2,098個(gè)cis-eQTL基因（FDR≤0.05）、863個(gè)trans-eQTL基因（FDR≤0.05）以及2,253個(gè)ASE基因。另外,鑒定到了33個(gè)至少與一種肉質(zhì)性狀顯著相關(guān)且同時(shí)具有eQTL和ASE信號(hào)的基因,以及63個(gè)同時(shí)具有eQTL和ASE信號(hào)且已報(bào)道是豬肉質(zhì)性狀或經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)的候選基因。（2）通過(guò)基因與IMF的相關(guān)分析,本研究鑒定了212個(gè)IMF顯著相關(guān)基因（FDR≤0.01）,且這些基因能顯著富集于AMPK/PPAR、能量代謝和脂質(zhì)代謝等信號(hào)通路。同時(shí),整合eQTL和GWAS的結(jié)果,我們使用SFXN4抗體鑒定到了4個(gè)IMF GWAS的候選基因,即SFXN4(p=2.51E-7)、EMG1(p=5.29E-4)、PCTP(p=1.58E-4)和AGT(p=1.06E-4)。（3）基于重測(cè)序和RNAseq數(shù)據(jù)開(kāi)展的6種MolQTL分析鑒定到了3,173個(gè)cis-eQTL基因（BBFDR≤0.05）、1,972個(gè)ASE基因（FDR≤0.05）、2,440個(gè)TreQTL基因（BBFDR≤0.05）、210個(gè)s QTL基因（BBFDR≤0.05）、281個(gè)APAQTL基因（BBFDR≤0.05）和559個(gè)CNV-eQTL基因（BBFDR≤0.05）。

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