背景及概述[1-2]
洋艾素為黃酮類物質，臭靈丹草為菊科植物翼齒六凌菊全草，又叫鹿耳林、大黑藥，傳統(tǒng)醫(yī)學認為其具有清熱解毒、止咳祛痰作用?，F有成藥靈丹草顆粒、片劑和合劑，用于風熱邪毒，咽喉腫痛，肺熱咳嗽；急性咽炎、扁桃體炎、上呼吸道感染等癥?，F代研究發(fā)現，臭靈丹草中不僅含有萜類功能性成分，含有黃酮類功能性成分，其中洋艾素就是臭靈丹草中的功能性指標性成分，《藥典》2010版規(guī)定臭靈丹草中洋艾素含量不得低于0.1%。通過文獻檢索，從臭靈丹草中提取洋艾素的方法公開甚少，尤其高純度的洋艾素制備方法。如文獻“臭靈丹菇類和黃酮化合物”采用的方法是水煎煮提取，硅膠柱色譜和重結晶等方法進行分離純化得到包括洋艾素在內的多種化合物。由于采用傳統(tǒng)的硅膠柱分離，分離過程溶劑體系選在復雜，梯度洗脫用量大，周期長，而且會分離過程中會產生死吸附現象，造成產品收率低，不適合洋艾素的制備。
應用[3-4]
洋艾素應用舉例如下：
1）制備一種治療急性呼吸衰竭的藥物，所述治療急性呼吸衰竭的藥物，按照重量份的主要原料為：葶藶子25-30份、白豆蔻19-24份、硬飛燕草堿2-6份、8-乙氧基滇烏堿26-34份、廣藿香酮25-30份、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷6-12份、木通苯乙醇苷B-5-10份、洋艾素16-20份、女貞苷4-8份、異茴芹素4-8份、檀香醇4-8份。本發(fā)明藥物根據急性呼吸衰竭的認識機理對原料成分進行嚴格挑選，從而達到全面康復的目的，具有起效快、作用穩(wěn)定、攜帶服用方便、長期服用無毒副作用的特點。
2）制備一種治療成人蛔蟲病的西藥，所述治療成人蛔蟲病的西藥，按照重量份的主要原料為：雪松醇2-6份、纈沙坦0.5-0.8份、相思豆堿5-9份、異烏藥內酯23-30份、3，29-二苯甲?；闃侨嗜?-17份、洋艾素15-25份、麻黃堿8-12份、豬苓酸C-4-6份、白頭翁皂苷A-5-10份、利多卡因5-7份。本發(fā)明藥物根據成人蛔蟲病的認識機理對原料成分進行嚴格挑選，從而達到全面康復的目的，具有起效快、作用穩(wěn)定、攜帶服用方便、長期服用無毒副作用的特點。
制備[1-2]
方法1：一種制備洋艾素的方法，其特征在于：取臭靈丹草粉碎，加入5-15倍量40-90%甲醇溶液超聲提取2-3次，提取液減壓濃縮至無醇放置沉淀，沉淀物濾出用飽和石灰石水溶解，除去不溶物，再調節(jié)中性，過濾，濾出物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，收集目標成分，濃縮結晶，干燥得洋艾素。所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選三元溶劑體系，優(yōu)選氯仿、甲醇、水，比例為4-10：3-7：2-5，上相為流動相，下相為固定相。所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選四元溶劑體系，優(yōu)選石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，比例為1-10：2-10：2-9：1-9，下相為流動相，上相為固定相。所述的高速逆流色譜分離時主機轉速可為700-1000rpm，流動相流速為1-4ml/min。本發(fā)明的優(yōu)勢是：采用了超臨界CO2梯度萃取，先萃取小分子非極性物質，再通入加夾帶劑萃取有效成分，所得粗提物含量高，萃取過程中能耗低、無污染、效率高，而且整個工藝操作簡單，易于實現工業(yè)化生產。
方法2：一種從臭靈丹草中提取洋艾素的方法，其特征在于以下步驟：：a取臭靈丹草粉碎40-80目，加入超臨界萃取釜中，在萃取壓力15-30MPa、溫度40-50℃的條件下，超臨界CO2梯度萃取，解析，得粗提物；b上述粗提物加入聚酰胺樹脂干燥，裝柱，乙醇溶液梯度洗脫，薄層檢測，收集目高濃度流分，濃縮結晶，再采用乙醇溶液溶解重結晶，干燥即得洋艾素。具體步驟為：臭靈丹草藥材粉碎80目，取1kg加入超臨界萃取釜中，通入液態(tài)CO2，設置在萃取壓力18MPa、溫度50℃，達到上述參數后，調整液態(tài)CO2流速為20kg/h，動態(tài)萃取2小時，在壓力5MPa，溫度50℃調件下解析萃取物棄去，再調節(jié)壓力25MPa，同時通入無水丙酮做夾帶劑，流速0.3L/h，萃取2小時，解析萃取物，加入100g聚酰胺樹脂混勻干燥，裝柱，先取400ml50%乙醇洗脫雜質，再用60%乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，濃縮至約1/3體積結晶，濾出再用80%乙醇回流溶解重結晶，干燥，得洋艾素720mg，經HPLC檢測，含量93.4%。
含量測定
洋艾素測定方法如下：采用高效液相色譜儀和二極管陣列(DAD)檢測器或者紫外檢測器，以C18色譜柱，乙腈-水為流動相，檢測波長253-256nm作為色譜條件，用流動相將洋艾素制成2-15μg/ml的對照品溶液，取靈丹草制劑，研細，混勻，精密稱取，制成的試品溶液，用微量進樣器進樣10-20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得靈丹草含片中洋艾素的量。
主要參考資料
[1] CN201110303897.1一種制備洋艾素的方法
[2] CN200510019121.1靈丹草含片及其制備方法和靈丹草含片的質量控制方法
[3] CN201611252806.5一種治療急性呼吸衰竭的藥物
[4] CN201611236265.7一種治療成人蛔蟲病的西藥