背景^[1-3]

亮綠SF染色液(1%)別稱是酸性綠5，Light green SF yellowish，是一種化學(xué)品，又稱亮綠SF（淡黃）、亮綠2G、亮綠S、酸性綠等，分子式C37H34N2Na2O9S3，分子量為792.84，易溶于水呈綠色溶液。亮綠SF染色液(1%)屬于漿質(zhì)染色劑可用于動物組織染色或與鐵蘇木素或其他核染料作對比染色。在植物組織學(xué)中作細胞質(zhì)和纖維染色和酸性品紅共染花粉管。亮綠SF染色液(1%)主要由亮綠SF、磷酸鹽、去離子水等組成，根據(jù)不同組織染色而異。

亮綠SF水中溶解度:200 g/l(20°C)，溶于醇用作細胞學(xué)上的復(fù)染色，或Gomori's步驟中用作苯胺蘭的替代物。

淺綠色三苯甲烷(LGSFY)是酸性三苯甲烷染料的二鈉鹽。它還稱為淺綠、麗絲胺綠SF、食品綠2、綠色205號、酸性綠、酸性亮綠5、酸性亮綠SF。除伊紅Y和bismark brown Y外，LGSFY是巴氏染色的重要成分。淺綠色SF淡黃色是膠原蛋白的組織學(xué)染色劑，也是食品和飲料允許使用的著色劑。

亮綠SF染色液(1%)通常用作核染色的細胞質(zhì)復(fù)染色，如番紅和富爾根染液。在組織病理學(xué)中，用于膠原纖維馬森三色染色、巴氏染色細胞學(xué)多色染色和組織切片微生物的特沃特染色。它是用于分化垂體分泌細胞的多色染色法的組成部分。淺綠色SF也能對植物細胞的纖維素細胞壁染色。

使用方法：按實驗具體要求操作。一般染色1～3min，根據(jù)不同組織染色而異。

亮綠SF染色液(1%)

亮綠SF染色液(1%)優(yōu)點：

顏色鮮明：亮綠SF染色液染色后綠色明顯，在顯微鏡下可更清楚地識別細胞結(jié)構(gòu)或組織成分。

專一性強：對某些組織成分，如膠原纖維，有較好的特異性，因此在特定場景下的組織染色效果突出。

方便使用：操作程序簡單，染色時間較短。

穩(wěn)定性好：室溫避光保存，有效期12個月。

應(yīng)用^[4][5]

亮綠SF染色液(1%)可以用于CsA對大鼠腦缺血再灌注損傷OX-42、iNOS表達的影響及對髓鞘的保護作用研究

通過采用改良線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型,用CsA作為干預(yù)藥物治療,采用免疫組化SP染色技術(shù),動態(tài)觀察腦缺血再灌注后大鼠海馬CA1區(qū)OX-42、iNOS以及胼胝體區(qū)髓鞘堿性蛋白(MBP)的表達情況,變色酸2R-亮綠SF（亮綠SF染色液(1%)）雙重染色法髓鞘染色,觀察急性腦缺血再灌注損傷后髓鞘的變化,及CsA的干預(yù)作用,并對大鼠神經(jīng)行為學(xué)進行評分,為探索腦缺血的神經(jīng)保護劑的應(yīng)用,提供理論依據(jù)和新的思路。

材料與方法1.實驗動物分組及給藥方法成年健康Sprague-Dawley(SD)大鼠72只,隨機分為3組,假手術(shù)組、模型組和環(huán)孢素A組,每組24只,每組分為4個亞組。環(huán)孢素A組手術(shù)后每天腹腔注射環(huán)孢素A(20mg/kg),模型組和假手術(shù)組每日腹腔注射等體積的生理鹽水2模型制作和入選標準采用改良線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。模型組和環(huán)孢素A組缺血2小時進行再灌注,假手術(shù)組僅分離頸總動脈。動物麻醉蘇醒后,參照Zea-longa等評分標準,1-3分為入選對象。3腦組織切片的制備大鼠心臟灌注后斷頭取腦后,常規(guī)固定、脫水、石蠟包埋。制成4μm和6μm的切片,分別用于免疫組化染色和變色酸2R-亮綠SF（亮綠SF染色液(1%)）雙重染色法髓鞘染色。4檢測指標(1)參照Zea-longa等評分標準,對大鼠神經(jīng)行為學(xué)進行評分；(2)髓鞘染色,光學(xué)顯微鏡下觀察髓鞘變化；(3)采用SP法進行免疫組化染色,觀察大鼠海馬CA1區(qū)OX-42、iNOS以及胼胝體區(qū)MBP的表達。5圖像分析每個標本隨機選取5個完整而不重疊的高倍鏡視野(×400),測定每個視野下的陽性區(qū)平均灰度值,以5個視野的平均灰度值的平均值作為該例的測量值。應(yīng)用圖象分析系統(tǒng)進行檢測。6統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件處理,實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±S)表示,采用單因素方差分析,組間比較采用LSD檢驗,α=0.05為顯著性檢驗性水準。

結(jié)果1實驗動物一般情況及神經(jīng)行為學(xué)評分假手術(shù)組：無神經(jīng)系統(tǒng)功能缺陷,動作敏捷,反應(yīng)靈敏,自由食水；模型組：精神萎靡,食欲不振,自主活動少,不同程度出現(xiàn)左側(cè)霍納氏征,追尾征以及強迫姿勢；環(huán)孢素A組較模型組情況改善,且神經(jīng)行為學(xué)評分優(yōu)于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2變色酸2R-亮綠SF（亮綠SF染色液(1%)）雙重染色法髓鞘染色結(jié)果顯示,假手術(shù)組髓鞘染色的切面紅綠相間,類似魚骨刺狀,排列緊密,髓鞘為紅色,軸索呈綠色。模型組1d、3d與假手術(shù)組相比無明顯差異,7d、14d胼胝體髓鞘染色疏松、空泡形成,髓鞘密度明顯降低。環(huán)孢素A組7d、14d胼胝體髓鞘密度較假手術(shù)組也明顯降低,但好于模型組。

參考文獻

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