什么是胰蛋白酶抑制劑？

胰蛋白酶抑制劑（BBI）是對(duì)胰蛋白酶有抑制活性的蛋白質(zhì)，存在于豆奶等許多豆制品中，具有較好的抗炎功效。它能夠與胰蛋白酶結(jié)合，從而阻止其水解蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中的肽鍵，進(jìn)而影響消化功能的一種藥物。臨床上主要用于治療急性胰腺炎、慢性胰腺炎等疾病?？诜﨎BI即顯示出良好的免疫調(diào)節(jié)作用，對(duì)自身免疫性疾病有較好的潛在治療效果。研究表明BBI能顯著地激活巨噬細(xì)胞內(nèi)抗病毒天然免疫，從而抑制人類免疫缺陷病毒（HIV-1）的感染和復(fù)制。

大豆中胰蛋白酶抑制劑的活性測(cè)定

檢測(cè)原理

胰蛋白酶可作用于其底物苯甲酰-L精氨酰-對(duì)硝基 苯胺(BAPNA)，使BAPNA發(fā)生水解，生成苯甲酰- L-精氨酸和淡茶色的對(duì)硝基苯胺，使溶液變成淡茶色。對(duì)硝基苯胺在 410 nm下有特征吸收。大豆制品中的胰蛋白酶抑制劑可抑制此反應(yīng)，使吸光度值下降，其下降程度與 胰蛋白酶抑制活性成正比。 采用分光光度計(jì)在410 nm 處測(cè)定該反應(yīng)前后的吸光度值，可定量分析胰蛋白酶抑制劑活性。

檢測(cè)方法

按表2分別吸取一定量的四種溶液分別加入至四個(gè)10 mL離心管中。 每一樣品的試樣稀釋液均需準(zhǔn)備相應(yīng)的空白溶液。樣品提取液和相應(yīng)的空白溶液在測(cè)定過(guò)程中應(yīng)同時(shí)進(jìn)行操作（包括離心步驟）。

表 2 胰蛋白酶抑制劑活性測(cè)定時(shí)各溶液加入量  (單位：mL)

（1）用渦旋振蕩器混勻離心管中的溶液，并置于37 C恒溫水浴鍋中，保溫10 min。

（2）在四個(gè)離心管中各加入1 mL胰蛋白酶使用液。用渦旋振蕩器將管內(nèi)溶液混勻后，將試管 放回到恒溫水浴鍋中。在37 C水浴中保溫10 min±5 s后，在標(biāo)準(zhǔn)試管中和樣品管中加入1 mL 乙酸溶液，混勻。

（3）將離心管置于離心機(jī)中，以4 000 r/min速度離心10 min。

（4）采用可見(jiàn)分光光度計(jì)，于410 nm波長(zhǎng)，用10 mm比色皿，以水調(diào)零，測(cè)定上清液的吸光度。 該溶液可在2 h內(nèi)保持穩(wěn)定。