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HPLC法測定重酒石酸去甲腎上腺素

2024/9/25 15:37:34 作者:南星

簡介

重酒石酸去甲腎上腺素(NE-B)為白色結(jié)晶性粉末,易溶于水,微溶于乙醇,在氯仿或乙醚中不溶。重酒石酸去甲腎上腺素屬于腎上腺素能α、β-受體激動藥,尤以α-受體作用為主。與腎上腺素相比,其收縮血管與升壓作用較強,并反射性地引起心率減慢,但興奮心臟,擴張支氣管作用較弱,主要用于抗休克。 臨床上主要利用它的升壓作用,以保證對腦等重要器官的血液供應。

重酒石酸去甲腎上腺素

背景技術

目前報道的測定去甲腎上腺素的方法有熒光法、毛細管電泳法、電致化學發(fā)光法,高效液相色譜法。高效液相色譜法多用電化學檢測器和熒光檢測器,而與化學發(fā)光檢測器聯(lián)用技術只見一篇報道。近年來,聯(lián)用技術的探索一直是分析領域的研究熱點,而高效液相色譜與化學發(fā)光的聯(lián)用更是一個亮點。研究發(fā)現(xiàn)鐵氰化鉀在堿性條件下(NaHCO3-NaOH緩沖溶液,pH=9.8)能夠氧化魯米諾產(chǎn)生化學發(fā)光,重酒石酸去甲腎上腺素存在可以大大增強其發(fā)光強度。基于此,結(jié)合高效液相色譜分離技術,在C18反相鍵合色譜柱上,流動相為鄰苯二甲酸氫鉀(0.01molL):甲醇等于92:8(體積比),pH值等于4.5的條件下,實現(xiàn)了對人體血清的重酒石酸去甲腎上腺素分離與測定。本方法流路簡單,不需程序梯度洗脫,不需柱前衍生,不需外加光源,從而消除了散射光對測定的影響,大大提高了靈敏度和準確度。

檢測方法

1、儀器和試劑

D-7000型高效液相色譜儀(日立公司);HL-2恒流泵(上海青浦滬西儀器廠);MCFL-A型多功能化學發(fā)光/生物發(fā)光分析系統(tǒng)(西安瑞邁電子科技有限公司);微超濾管(VIVASPIN 100uL)。

重酒石酸去甲腎上腺素(中國藥品生物制品檢定所)配成濃度為1.0x10-4g/mL的儲備液;0.01mol/L Luminol儲備液;K3Fe(CN)6(成都化學試劑廠)配成1.0x10-2mol/L儲備液;0.01mo/L鄰苯二甲酸氫鉀(上海試劑三廠)儲備液;甲醇(天津四友生物技術有限公司);血清樣品由遼寧省沈陽市沈北新區(qū)中心醫(yī)院化驗室提供,其余試劑均為分析純,水為二次蒸餾水。

2、實驗方法

分別將流動相和K3Fe(CN)6溶液、Luminol溶液(NaHCO3-NaOH配制,pH=9.8)通過相應的管道輸入分析系統(tǒng),待基線穩(wěn)定后,通過高效液相色譜進樣閥(20uL)進樣,記錄重酒石酸去甲腎上腺素反應的發(fā)光信號,以相對峰高定量。

參考文獻

[1] 張迎春,張迎雪,徐德泉. 高效液相色譜化學發(fā)光法測定人體血清中的重酒石酸去甲腎上腺素[J]. 海南師范大學學報(自然科學版),2008,21(2):176-179. DOI:10.3969/j.issn.1674-4942.2008.02.016. 

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