背景^[1-3]

RAKOFF染色液是一種在細(xì)胞學(xué)常規(guī)染色中使用的試劑，主要用于檢測陰道上皮雌激素水平。這種染色液由多種成分組成，包括淡綠和伊紅等，操作相對簡單，常用于臨床陰道細(xì)胞學(xué)涂片的快速測定雌激素水平。

Rakoff染色液是一種用于實(shí)驗(yàn)和科研的染色試劑，主要用于細(xì)胞或組織的染色，以便在顯微鏡下觀察和分析。以下是對Rakoff染色液的詳細(xì)介紹：

RAKOFF染色液

一、產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品名稱：Rakoff染色液

規(guī)格：100ml

貨號：XG-RY1581（根據(jù)某公司目錄信息）

二、產(chǎn)品用途

Rakoff染色液能夠較好地區(qū)分鱗狀上皮細(xì)胞的嗜酸性細(xì)胞質(zhì)和嗜堿性細(xì)胞質(zhì)，在細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)研究中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。它可以幫助研究人員更清晰地觀察和分析細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和特性。

三、儲存條件

儲存于室溫下，避光保存。

有效期一般為12個(gè)月（根據(jù)某公司目錄信息），但具體有效期可能因產(chǎn)品批次和儲存條件而有所不同。

四、實(shí)驗(yàn)方法

Rakoff染色液的實(shí)驗(yàn)方法可能因具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜅l件而有所不同。一般來說，實(shí)驗(yàn)方法包括配制對照品溶液、進(jìn)行染色、觀察和分析等步驟。在實(shí)驗(yàn)中，需要嚴(yán)格按照說明書或?qū)嶒?yàn)方案進(jìn)行操作，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

RAKOFF染色液的具體使用方法和注意事項(xiàng)，以下是一些詳細(xì)信息：

使用前需準(zhǔn)備的材料包括細(xì)胞刷、生理鹽水、試管和載玻片。

操作步驟大致如下：

1.使用細(xì)胞刷沿陰道側(cè)壁刷取黏膜鱗狀上皮細(xì)胞，放入裝有1～2ml生理鹽水的試管內(nèi)。

2.在試管內(nèi)滴入3～5滴RAKOFF染色液，并輕輕混勻。

3.取1～2滴混合液于載玻片上，制成細(xì)胞涂片。

4.待涂片干燥后，使用中性樹膠封片。

5.染色結(jié)果為：嗜酸性細(xì)胞質(zhì)呈粉紅色，嗜堿性細(xì)胞質(zhì)呈淡綠色，而角化細(xì)胞的固縮核不著色。

6.使用時(shí)應(yīng)注意細(xì)胞涂片均勻，且為了安全和健康，建議穿戴實(shí)驗(yàn)服和一次性手套操作。

五、注意事項(xiàng)

安全操作：在使用Rakoff染色液時(shí)，應(yīng)佩戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)裝備，如手套、護(hù)目鏡等，以避免與皮膚或眼睛直接接觸。

準(zhǔn)確配制：按照說明書或?qū)嶒?yàn)方案準(zhǔn)確配制染色液，避免濃度過高或過低影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

儲存條件：注意儲存條件，避免陽光直射和高溫環(huán)境，以免影響染色液的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

廢棄物處理：使用后的染色液和廢棄物應(yīng)按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行處理，避免對環(huán)境造成污染。

應(yīng)用^[4][5]

RAKOFF染色液可以用于澤瀉醇B乙酸酯通過調(diào)節(jié)腸道菌群和腸道雌激素受體抗絕經(jīng)后動脈粥樣硬化的機(jī)制研究

收集接受主動脈置換術(shù)的絕經(jīng)前(<45歲)和絕經(jīng)后(>55歲)女性主動脈血管及絕經(jīng)前(<45歲)正常女性和絕經(jīng)后(>55歲)冠心病女性患者糞便。16SrRNA基因高通量測序分析女性糞便中的腸道菌群,RAKOFF染色液HE染色觀察女性主動脈血管的病理變化,透射電鏡觀察女性血管中的超微結(jié)構(gòu)變化,免疫組化染色檢測女性血管中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、ERα、ERβ、GPER、SRC、PI3K和p-AKT的表達(dá)。分析絕經(jīng)前后女性主動脈炎癥、雌激素受體表達(dá)及腸道菌群組成的相關(guān)性。第二章:使用LDLR-/-小鼠合并高脂飲食復(fù)制動脈粥樣硬化模型,對動脈粥樣硬化模型小鼠進(jìn)行雙側(cè)卵巢切除復(fù)制絕經(jīng)后動脈粥樣硬化模型(模型組),同時(shí)設(shè)置C57BL/6正常飲食和高脂飲食組以及LDLR-/-小鼠正常飲食組。對絕經(jīng)后動脈粥樣硬化模型小鼠分別進(jìn)行AB23A治療實(shí)驗(yàn)、糞菌移植實(shí)驗(yàn)及AB23A與抗生素聯(lián)合應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)周期結(jié)束后,使用生化試劑盒檢測小鼠血清中TC、TG、LDL-c及HDL-c水平以評價(jià)血脂,ELISA試劑盒檢測小鼠血清中IL-1β、IL-6及TNF-α水平以評價(jià)血清炎癥,油紅O染色及RAKOFF染色液檢測小鼠主動脈及主動脈根部切片中陽性面積以評價(jià)動脈粥樣硬化損傷,Masson染色檢測小鼠主動脈根部切片中膠原以評價(jià)纖維帽面積,免疫組織化學(xué)染色檢測小鼠主動脈根部切片及結(jié)腸中NLRP3和IL-1β的表達(dá)水平以評價(jià)組織炎癥,HE染色及RAKOFF染色液檢測小鼠結(jié)腸組織形態(tài)以評價(jià)組織病理損傷,免疫組織熒光染色檢測小鼠結(jié)腸中Claudin-1、Occludin和ZO-1的表達(dá)水平以評價(jià)緊密連接的狀態(tài),蛋白印跡法檢測小鼠結(jié)腸組織中NLRP3、IL-1β、Claudin-1、Occludin和ZO-1的蛋白表達(dá)水平以進(jìn)一步確認(rèn)結(jié)腸中炎癥和緊密連接狀態(tài)。16SrRNA基因高通量測序分析小鼠糞便中腸道菌群。分析AB23A模型小鼠治療實(shí)驗(yàn)中小鼠動脈粥樣硬化相關(guān)癥狀、腸道菌群及緊密連接之間相關(guān)性。

對絕經(jīng)后動脈粥樣硬化模型小鼠進(jìn)行AB23A治療實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)周期結(jié)束后,使用ELISA試劑盒檢測小鼠血清中雌激素水平,免疫組織化學(xué)染色檢測小鼠結(jié)腸中ERα、ERβ、GPER和SRC的表達(dá)水平,免疫組織熒光染色檢測小鼠結(jié)腸中PI3K和p-AKT的表達(dá)水平,蛋白印跡法檢測小鼠結(jié)腸組織中ERα、ERβ、GPER、SRC、PI3K、AKT和p-AKT的蛋白表達(dá)水平。應(yīng)用膽固醇負(fù)荷的Caco-2細(xì)胞復(fù)制腸道上皮細(xì)胞損傷模型,使用AB23A并聯(lián)合ERα抑制劑MPP、ERβ抑制劑PHTPP、GPER抑制劑G-15、PI3K抑制劑LY294002或AKT抑制劑10-DEBC抑制相應(yīng)蛋白,或聯(lián)合ERαsiRNA、ERβsiRNA、GPER siRNA或SRC siRNA沉默相應(yīng)基因的表達(dá),作用于Caco-2細(xì)胞,并建立不同的對照和分組。MTT法檢測細(xì)胞活性,油紅O及RAKOFF染色液染色評價(jià)細(xì)胞脂質(zhì)堆積,免疫熒光法檢測細(xì)胞中SRC、ERα、ERβ、GPER、PI3K、p-AKT、Claudin-1、Occludin及ZO-1單獨(dú)或共同表達(dá)的情況,蛋白印跡法檢測細(xì)胞中SRC、ERα、ERβ、GPER、NLRP3、IL-1β、PI3K、p-AKT、Claudin-1、Occludin、ZO-1的蛋白表達(dá)情況,免疫共沉淀法檢測細(xì)胞中GPER與SRC的相互作用。

參考文獻(xiàn)

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