背景[1-3]
RAKOFF染色液是一種在細胞學常規(guī)染色中使用的試劑，主要用于檢測陰道上皮雌激素水平。這種染色液由多種成分組成，包括淡綠和伊紅等，操作相對簡單，常用于臨床陰道細胞學涂片的快速測定雌激素水平。
Rakoff染色液是一種用于實驗和科研的染色試劑，主要用于細胞或組織的染色，以便在顯微鏡下觀察和分析。以下是對Rakoff染色液的詳細介紹：
RAKOFF染色液
一、產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱：Rakoff染色液
規(guī)格：100ml
貨號：XG-RY1581（根據(jù)某公司目錄信息）
二、產(chǎn)品用途
Rakoff染色液能夠較好地區(qū)分鱗狀上皮細胞的嗜酸性細胞質(zhì)和嗜堿性細胞質(zhì)，在細胞學和組織學研究中具有重要的應用價值。它可以幫助研究人員更清晰地觀察和分析細胞的結(jié)構(gòu)和特性。
三、儲存條件
儲存于室溫下，避光保存。
有效期一般為12個月（根據(jù)某公司目錄信息），但具體有效期可能因產(chǎn)品批次和儲存條件而有所不同。
四、實驗方法
Rakoff染色液的實驗方法可能因具體實驗目的和條件而有所不同。一般來說，實驗方法包括配制對照品溶液、進行染色、觀察和分析等步驟。在實驗中，需要嚴格按照說明書或?qū)嶒灧桨高M行操作，以確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。
RAKOFF染色液的具體使用方法和注意事項，以下是一些詳細信息：
使用前需準備的材料包括細胞刷、生理鹽水、試管和載玻片。
操作步驟大致如下：
1.使用細胞刷沿陰道側(cè)壁刷取黏膜鱗狀上皮細胞，放入裝有1～2ml生理鹽水的試管內(nèi)。
2.在試管內(nèi)滴入3～5滴RAKOFF染色液，并輕輕混勻。
3.取1～2滴混合液于載玻片上，制成細胞涂片。
4.待涂片干燥后，使用中性樹膠封片。
5.染色結(jié)果為：嗜酸性細胞質(zhì)呈粉紅色，嗜堿性細胞質(zhì)呈淡綠色，而角化細胞的固縮核不著色。
6.使用時應注意細胞涂片均勻，且為了安全和健康，建議穿戴實驗服和一次性手套操作。
五、注意事項
安全操作：在使用Rakoff染色液時，應佩戴適當?shù)姆雷o裝備，如手套、護目鏡等，以避免與皮膚或眼睛直接接觸。
準確配制：按照說明書或?qū)嶒灧桨笢蚀_配制染色液，避免濃度過高或過低影響實驗結(jié)果。
儲存條件：注意儲存條件，避免陽光直射和高溫環(huán)境，以免影響染色液的質(zhì)量和穩(wěn)定性。
廢棄物處理：使用后的染色液和廢棄物應按照相關(guān)規(guī)定進行處理，避免對環(huán)境造成污染。
應用[4][5]
RAKOFF染色液可以用于澤瀉醇B乙酸酯通過調(diào)節(jié)腸道菌群和腸道雌激素受體抗絕經(jīng)后動脈粥樣硬化的機制研究
收集接受主動脈置換術(shù)的絕經(jīng)前(<45歲)和絕經(jīng)后(>55歲)女性主動脈血管及絕經(jīng)前(<45歲)正常女性和絕經(jīng)后(>55歲)冠心病女性患者糞便。16SrRNA基因高通量測序分析女性糞便中的腸道菌群,RAKOFF染色液HE染色觀察女性主動脈血管的病理變化,透射電鏡觀察女性血管中的超微結(jié)構(gòu)變化,免疫組化染色檢測女性血管中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、ERα、ERβ、GPER、SRC、PI3K和p-AKT的表達。分析絕經(jīng)前后女性主動脈炎癥、雌激素受體表達及腸道菌群組成的相關(guān)性。第二章:使用LDLR-/-小鼠合并高脂飲食復制動脈粥樣硬化模型,對動脈粥樣硬化模型小鼠進行雙側(cè)卵巢切除復制絕經(jīng)后動脈粥樣硬化模型(模型組),同時設(shè)置C57BL/6正常飲食和高脂飲食組以及LDLR-/-小鼠正常飲食組。對絕經(jīng)后動脈粥樣硬化模型小鼠分別進行AB23A治療實驗、糞菌移植實驗及AB23A與抗生素聯(lián)合應用實驗。實驗周期結(jié)束后,使用生化試劑盒檢測小鼠血清中TC、TG、LDL-c及HDL-c水平以評價血脂,ELISA試劑盒檢測小鼠血清中IL-1β、IL-6及TNF-α水平以評價血清炎癥,油紅O染色及RAKOFF染色液檢測小鼠主動脈及主動脈根部切片中陽性面積以評價動脈粥樣硬化損傷,Masson染色檢測小鼠主動脈根部切片中膠原以評價纖維帽面積,免疫組織化學染色檢測小鼠主動脈根部切片及結(jié)腸中NLRP3和IL-1β的表達水平以評價組織炎癥,HE染色及RAKOFF染色液檢測小鼠結(jié)腸組織形態(tài)以評價組織病理損傷,免疫組織熒光染色檢測小鼠結(jié)腸中Claudin-1、Occludin和ZO-1的表達水平以評價緊密連接的狀態(tài),蛋白印跡法檢測小鼠結(jié)腸組織中NLRP3、IL-1β、Claudin-1、Occludin和ZO-1的蛋白表達水平以進一步確認結(jié)腸中炎癥和緊密連接狀態(tài)。16SrRNA基因高通量測序分析小鼠糞便中腸道菌群。分析AB23A模型小鼠治療實驗中小鼠動脈粥樣硬化相關(guān)癥狀、腸道菌群及緊密連接之間相關(guān)性。
對絕經(jīng)后動脈粥樣硬化模型小鼠進行AB23A治療實驗。實驗周期結(jié)束后,使用ELISA試劑盒檢測小鼠血清中雌激素水平,免疫組織化學染色檢測小鼠結(jié)腸中ERα、ERβ、GPER和SRC的表達水平,免疫組織熒光染色檢測小鼠結(jié)腸中PI3K和p-AKT的表達水平,蛋白印跡法檢測小鼠結(jié)腸組織中ERα、ERβ、GPER、SRC、PI3K、AKT和p-AKT的蛋白表達水平。應用膽固醇負荷的Caco-2細胞復制腸道上皮細胞損傷模型,使用AB23A并聯(lián)合ERα抑制劑MPP、ERβ抑制劑PHTPP、GPER抑制劑G-15、PI3K抑制劑LY294002或AKT抑制劑10-DEBC抑制相應蛋白,或聯(lián)合ERαsiRNA、ERβsiRNA、GPER siRNA或SRC siRNA沉默相應基因的表達,作用于Caco-2細胞,并建立不同的對照和分組。MTT法檢測細胞活性,油紅O及RAKOFF染色液染色評價細胞脂質(zhì)堆積,免疫熒光法檢測細胞中SRC、ERα、ERβ、GPER、PI3K、p-AKT、Claudin-1、Occludin及ZO-1單獨或共同表達的情況,蛋白印跡法檢測細胞中SRC、ERα、ERβ、GPER、NLRP3、IL-1β、PI3K、p-AKT、Claudin-1、Occludin、ZO-1的蛋白表達情況,免疫共沉淀法檢測細胞中GPER與SRC的相互作用。
參考文獻
[1]The gut microbiota during the progression of atherosclerosis in the perimenopausal period shows specific compositional changes and significant correlations with circulating lipid metabolites.[J].Meng Qinghai;Ma Menghua;Zhang Weiwei;Bi Yunhui;Cheng Peng;Yu Xichao;Fu Yu;Chao Ying;Ji Tingting;Li Jun;Chen Qi;Zhang Qichun;Li Yu;Shan Jinjun;Bian Huimin.Gut microbes,2021
[2]Endotoxinemia Accelerates Atherosclerosis via Electrostatic Charge-Mediated Monocyte Adhesion.[J].Schumski Ariane;OrtegaGómez Almudena;Wichapong Kanin;Winter Carla;Lemnitzer Patricia;Viola Joana R;PinillaVera Mayra;Folco Eduardo;SolisMezarino Victor;V?lkerAlbert Moritz;Maas Sanne L;Pan Chang;Perez Olivares Laura;Winter Janine;Hackeng Tilman;Karlsson Mikael C I;Zeller Tanja;Imhof Axel;Baron Rebecca M;Nicolaes Gerry A F;Libby Peter;Maegdefessel Lars;Kamp Frits;Benoit Martin;D?ring Yvonne;Soehnlein Oliver.Circulation,2020
[3]β-estradiol adjusts intestinal function via ERβand GPR30 mediated PI3K/AKT signaling activation to alleviate postmenopausal dyslipidemia[J].Qinghai Meng;;Jun Li;;Ying Chao;;Yunhui Bi;;Weiwei Zhang;;Yuhan Zhang;;Tingting Ji;;Yu Fu;;Qi Chen;;Qichun Zhang;;Yu Li;;Huimin Bian.Biochemical Pharmacology,2020(prep)
[4]G Protein-Coupled Estrogen Receptor in Immune Cells and Its Role in Immune-Related Diseases.[J].Notas George;Kampa Marilena;Castanas Elias.Frontiers in endocrinology,2020
[5]孟慶海.澤瀉醇B乙酸酯通過調(diào)節(jié)腸道菌群和腸道雌激素受體抗絕經(jīng)后動脈粥樣硬化的機制研究[D].南京中醫(yī)藥大學,2021.