背景[1-7]
熒光原位雜交技術服務是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列，將有放射性或非放射性的外源核酸（即探針）與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）則是在放射性原位雜交技術的基礎上發(fā)展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記的原位雜交方法，是利用熒光標記的DNA探針來檢測在細胞、組織和腫瘤的特定DNA序列的強大分子診斷技術。
首先將樣本DNA變性，加入特定的熒光標記的探針與變性的樣本混合進行雜交，退火得到雙鏈DNA。探針信號能夠被熒光顯微鏡捕獲，從而定性、定量地檢測目標DNA。與其它用于研究染色體的技術不同，F(xiàn)ISH操作靈活，不需要在正在分裂的細胞進行檢測，因而能夠用來檢測或確認基因或染色體是否異常，通常用于遺傳咨詢，醫(yī)學和品種鑒定、DNA特定功能研究。
利用FISH方法還可檢測非整倍體，微缺失綜合征以及基因重排等，這些指標對很多遺傳性疾病，如白血病，淋巴瘤，實體瘤，自閉癥等發(fā)育綜合征有重要的臨床意義。實驗流程：FISH樣本的制備→探針的制備→探針標記→雜交→染色體顯帶→熒光顯微鏡檢測→結(jié)果分析。
特點：原位雜交的探針按標記分子類型分為放射性標記和非放射性標記。用同位素標記的放射性探針優(yōu)勢在于對制備樣品的要求不高，可以通過延長曝光時間加強信號強度，故較靈敏。缺點是探針不穩(wěn)定、自顯影時間長、放射線的散射使得空間分辨率不高、及同位素操作較繁瑣等。采用熒光標記系統(tǒng)則可克服這些不足，這就是FISH技術。
FISH技術作為非放射性檢測體系，具有以下優(yōu)點:1、熒光試劑和探針經(jīng)濟、安全；2、探針穩(wěn)定，一次標記后可在兩年內(nèi)使用；3、實驗周期短、能迅速得到結(jié)果、特異性好、定位準確；4、FISH可定位長度在1kb的DNA序列，其靈敏度與放射性探針相當；5、多色FISH通過在同一個核中顯示不同的顏色可同時檢測多種序列；6、既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構的變化，也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結(jié)構。
應用[8][9]
熒光原位雜交技術服務可用于檢測癌癥相關基因位點：
在熒光原位雜交檢測乳腺癌HER2基因狀態(tài)實驗中探討熒光原位雜交(FISH),與免疫組織化學(IHC)染色(3+)和(2+)檢測HER2基因狀態(tài)的結(jié)果的一致性、導致兩者差異的可能原因及FISH檢測HER2基因狀態(tài)的必要性和可行性。方法采用PathVysionTM探針試劑盒,以FISH方法,對28例IHCEnVision法染色分別為(3+)、(2+)、(1+)和陰性(-)的乳腺癌石蠟切片標本進行HER2基因狀態(tài)的檢測。
結(jié)果HER2表達(3+)的12例標本中,10例HER2基因擴增,其中2例為17號染色體多體,另2例無擴增的病例均為多體;IHC為(2+)的10例標本中,7例為HER2基因擴增,其中1例為多體,另3例無擴增病例中2例為多體;IHC為(1+)的3例標本均無HER2基因擴增,其中1例為多體;IHC(-)的3例標本均無基因擴增,其中1例為多體。結(jié)論IHC是初步篩查HER2狀態(tài)的首選方法;因IHC(2+)與FISH檢測結(jié)果差異較大,所以這類患者應做FISH確診;IHC(3+)存在假陽性,主要原因可能是由于17號染色體非整倍體,必要時這類患者也應做FISH。
參考文獻
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