背景[1-3]
HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂是生物學研究中常用的一種緩沖溶液，用于細胞培養(yǎng)、組織運輸和實驗過程中細胞的清洗等。傳統(tǒng)的Hanks'平衡鹽溶液含有鈣和鎂離子，但也有一些修改版的配方，其中不含鈣和鎂（通常表示為HBSS without calcium and magnesium或HBSS-/-）。
HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂
HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂主要由以下幾種鹽組成：
氯化鈉（NaCl）：提供主要的滲透壓和離子平衡。
氯化鉀（KCl）：維持細胞內(nèi)外的鉀離子濃度梯度。
磷酸二氫鈉（Na2HPO4）和磷酸二氫鉀（KH2PO4）：作為緩沖系統(tǒng)，幫助維持溶液的pH值。
碳酸氫鈉（NaHCO3）：作為緩沖系統(tǒng)的一部分，幫助維持溶液的pH值。
HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂的使用場景包括：
細胞解離：某些細胞類型需要在沒有鈣和鎂的情況下進行解離，因為這些離子可能促進細胞之間的粘附。
細胞清洗：在細胞分選或其他實驗操作中，可能需要使用不含鈣鎂的溶液來清洗細胞，以避免這些離子對實驗的干擾。
細胞收集：在進行某些細胞學實驗時，可能會使用不含鈣鎂的Hanks'平衡鹽溶液來收集細胞。
組織運輸和保存：有時也會使用這種溶液來運輸和短期保存組織樣本。
HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂注意事項：
使用前應確認溶液的pH值和滲透壓：確保它們適合特定的細胞類型和實驗要求。
無菌操作：在細胞培養(yǎng)等實驗中，應確保溶液是無菌的，以避免污染。
儲存條件：應按照制造商的指導存儲溶液，并在打開后盡快使用，避免污染。
HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂使用步驟:
1.預熱溶液：將HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂預熱至37°C，以模擬體內(nèi)溫度，減少對細胞的應激。
2.清洗細胞：
將培養(yǎng)的細胞從培養(yǎng)容器中取出。
使用無菌吸管或移液器，輕輕吸除培養(yǎng)液。
用HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂的溶液輕輕沖洗細胞，去除殘留的培養(yǎng)液和代謝廢物。通常需要沖洗2-3次。
3.細胞解離：
如果需要進行細胞解離，使用HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂可以減少細胞間的粘連，便于解離過程。
將HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂加入含有細胞的容器中，輕輕搖動或吹打以幫助細胞解離。
4.細胞計數(shù)和稀釋：
可以使用HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂來稀釋細胞進行計數(shù)，因為它提供了與細胞生長相似的離子環(huán)境。
將適量的細胞懸液與HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂混合，然后使用細胞計數(shù)器進行計數(shù)。
5.細胞運輸：
HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂也用于運輸細胞，特別是當需要在實驗室之間轉移細胞時。
6.配制其他溶液：
HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂可以作為基礎溶液，用于配制其他細胞培養(yǎng)或實驗所需的溶液。
應用[4][5]
HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂可以用于阿司匹林對結腸癌細胞保護性自噬的作用及機制研究
研究阿司匹林對結腸癌細胞“保護性自噬”的作用及可能的機制。
方法1.通過TIMER和Prognsan數(shù)據(jù)庫分析自噬相關蛋白SQSTM1/p62在結腸癌中表達水平及其對生存期的影響;免疫組化分析SQSTM1/p62在結腸癌及癌旁組織中的表達,并探討其表達水平與患者病理資料的相關性;
2.CCK-8、平板克隆形成、劃痕愈合實驗檢測阿司匹林對結腸癌細胞HCT-116、SW480增殖、集落形成和遷移能力影響;利用HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂模擬體內(nèi)營養(yǎng)缺乏微環(huán)境,基于此分為4組:正常對照組、HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂干預組、低劑量阿司匹林+Hank’s干預組、高劑量阿司匹林+Hank’s干預組,HE染色觀察細胞形態(tài)變化、透射電鏡觀察細胞自噬、Western blot檢測自噬及凋亡相關蛋白(p62、LC3、Bax、Bcl-2)的表達;慢病毒轉染技術構建HCT-116、SW480自噬研究的細胞模型,熒光顯微鏡、流式細胞儀檢測轉染效率,激光共聚焦顯微鏡檢測上述4組細胞內(nèi)自噬流的變化;
3. Western blot檢測上述4組TRIM33蛋白的表達情況;利用脂質體法轉染TRIM33-si RNA,Western blot檢測敲降效率,在此基礎上將實驗分為3組:陰性對照組、si-TRIM33組、阿司匹林+si-TRIM33組,透射電鏡用于觀察自噬、Western blot檢測TRIM33、p62、LC3蛋白表達的變化。
結果1.TIMER數(shù)據(jù)庫提示SQSTM1/p62在結腸癌中高表達(P<0.05);Prognsan數(shù)據(jù)庫提示SQSTM1/p62表達水平越高,患者預后越好;免疫組化結果示SQSTM1/p62在結腸癌組織中的表達顯著高于癌旁組織(P<0.05),其表達水平與患者臨床病理資料均無關(P>0.05);
2.CCK-8結果顯示,阿司匹林抑制結腸癌細胞的增殖,其中HCT-116在24h和48h的IC50分別為2.96、1.34mmol/L,SW480在24h和48h的IC50分別為1.74、1.37mmol/L,選取0.5mmol/L、1mmol/L進行下列實驗;平板克隆形成、劃痕愈合實驗結果提示阿司匹林抑制結腸癌細胞的克隆形成及遷移能力(P<0.05),HE染色結果提示:與正常對照組相比,HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂干預組細胞形態(tài)變圓,細胞密度顯著減少,在HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂干預組的基礎上阿司匹林處理后,細胞核位置深染,胞質濃縮,細胞密度進一步減少;透射電鏡結果表明,與HCT-116正常組細胞相比,Hank’s干預組胞質內(nèi)可見大量自噬小體及自噬溶酶體,在Hank’s干預組的基礎上給予阿司匹林后,胞質內(nèi)自噬小體和自噬溶酶體顯著減少,線粒體嵴斷裂;Western blot結果顯示:與正常對照組相比,HANKS'平衡鹽溶液,不含鈣鎂干預組p62蛋白表達水平下降,LC3II/ACTB、Bax/Bcl-2的表達上升(P<0.05),與Hank’s干預組相比,阿司匹林干預后p62、Bax/Bcl-2蛋白表達上升,LC3II/ACTB的表達下降(P<0.05);流式細胞儀和熒光顯微鏡結果顯示:與對照組結腸癌細胞相比,轉染組細胞熒光表達率約達90%以上,提示細胞系構建成功;激光共聚焦顯微鏡檢測自噬流結果顯示:與對照組細胞相比,Hank’s干預組細胞內(nèi)紅綠色熒光斑點數(shù)目明顯增加,表明自噬被激活;與Hank’s干預組相比,阿司匹林干預后出現(xiàn)紅綠色熒光均減弱,說明阿司匹林可以抑制Hank’s誘導的自噬流.
參考文獻
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