背景^[1-3]

BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞是一種來(lái)源于48歲女性乳癌患者的人乳腺癌細(xì)胞系。這些細(xì)胞具有上皮細(xì)胞樣的形態(tài)，并且在培養(yǎng)中表現(xiàn)為貼壁生長(zhǎng)的特性。

細(xì)胞特性：

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)；

細(xì)胞活力：通常高于90%，具體數(shù)值可能因供應(yīng)商和批次不同而有所差異；

污染檢測(cè)：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性，確保細(xì)胞的無(wú)菌狀態(tài)。

BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究領(lǐng)域，包括但不限于以下幾個(gè)方面：

乳腺癌發(fā)病機(jī)制研究：通過(guò)BCAP-37細(xì)胞系，可以研究乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制以及相關(guān)的基因表達(dá)和信號(hào)通路。

藥物篩選與評(píng)估：BCAP-37細(xì)胞系可用于抗癌藥物的篩選和評(píng)估，幫助研究人員發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)和藥物。

細(xì)胞生物學(xué)研究：BCAP-37細(xì)胞系還可用于細(xì)胞生物學(xué)的基本研究，如細(xì)胞增殖、分化、凋亡等過(guò)程的調(diào)控機(jī)制。

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：常用培養(yǎng)基包括DMEM（高糖）+10%FBS，也有文獻(xiàn)提及使用RPMI-1640（w/o Hepes）+10%胎牛血清。具體培養(yǎng)基配方可能因供應(yīng)商和實(shí)驗(yàn)需求而有所不同。

培養(yǎng)溫度與氣體環(huán)境：37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

傳代方法：首次傳代建議比例為1:2-1:3，之后可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況調(diào)整傳代比例至1:3~1:6。傳代時(shí)通常使用胰蛋白酶進(jìn)行消化，使細(xì)胞脫壁后重新接種到新的培養(yǎng)瓶中。

BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞

BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4][5]

BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞可以用于去甲斑蝥素誘導(dǎo)的人乳腺癌細(xì)胞系Bcap-37的凋亡作用及其相關(guān)機(jī)制的研究

利用細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù),研究去甲斑蝥素(noncantharidin,NCTD)誘導(dǎo)BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制。

方法：采用MTT法檢測(cè)NCTD對(duì)BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞24h和48h的生長(zhǎng)抑制作用,篩選藥物最適濃度和最佳作用時(shí)間；AO/EB雙染法、形態(tài)學(xué)觀察來(lái)分析NCTD誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞Bcap-37的凋亡變化；DNA凝膠電泳、彗星實(shí)驗(yàn)探討細(xì)胞DNA的損傷情況；激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)NCTD對(duì)線粒體膜電位、細(xì)胞內(nèi)活性氧等自由基以及Hsp70、Caspase-3蛋白表達(dá)的影響,并用流式細(xì)胞術(shù)分析NCTD誘導(dǎo)Bcap-37細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期變化的關(guān)系。

結(jié)果：1.BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞MTT檢測(cè)結(jié)果表明,NCTD在體外具有抑制Bcap-37細(xì)胞增殖的作用,降低細(xì)胞的存活率(p<0.01),具有明顯的量效和時(shí)間依賴性,其最佳濃度在10μg/ml左右；AO/EB染色后,通過(guò)熒光顯微鏡可觀察到細(xì)胞凋亡的形態(tài)特征,如細(xì)胞變圓、胞膜褶皺、核碎裂等,并出現(xiàn)凋亡小體。

2. BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明,NCTD可使G1期細(xì)胞比例明顯降低,S期和G2/M期細(xì)胞比例升高,細(xì)胞凋亡率上升。通過(guò)DNA瓊脂糖凝膠電泳和彗星實(shí)驗(yàn)表明,一定濃度的NCTD能夠?qū)cap-37細(xì)胞的DNA造成損傷,發(fā)生拖尾現(xiàn)象,并可見(jiàn)以約200bp為基數(shù)的DNA片斷組成的“梯狀”條帶。

3. NCTD可刺激BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞線粒體膜電位ΔΨm降低,使細(xì)胞內(nèi)ROS含量升高,并同時(shí)增強(qiáng)H2O2的生成,抑制CAT酶的活性。

4. NCTD作用24h后的細(xì)胞與對(duì)照組比較,抑癌基因蛋白Caspase-3的表達(dá)上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；熱休克蛋白Hsp70的表達(dá)隨藥物濃度的變化而變化,與其對(duì)腫瘤細(xì)胞的雙重調(diào)節(jié)功能吻合。

結(jié)論：1.NCTD對(duì)BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制增殖作用,呈時(shí)間-劑量效應(yīng)關(guān)系；凝膠電泳結(jié)果可見(jiàn)細(xì)胞凋亡的典型DNA“梯狀”條帶和“彗星”拖尾現(xiàn)象。2.NCTD誘導(dǎo)Bcap-37細(xì)胞凋亡的機(jī)制與其干擾細(xì)胞周期有關(guān),并呈現(xiàn)細(xì)胞周期阻滯現(xiàn)象。3.細(xì)胞內(nèi)ROS含量增加,線粒體膜電位下降,顯示線粒體氧化損傷途徑可能是NCTD促進(jìn)Bcap-37細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一。4.NCTD通過(guò)調(diào)節(jié)Caspase-3、Hsp70蛋白的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)BCAP-37人乳腺癌細(xì)胞的凋亡說(shuō)明NCTD能影響癌細(xì)胞某些基因的表達(dá)并改變酶的生理活性,從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。

參考文獻(xiàn)

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