背景^[1-3]

H22小鼠肝癌細(xì)胞是一種常用的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株，主要用于科學(xué)研究。這些細(xì)胞是從小鼠腹水中分離出來(lái)的，由大連醫(yī)科學(xué)院建立。H22小鼠肝癌細(xì)胞的特性包括淋巴母細(xì)胞的形態(tài)和懸浮生長(zhǎng)的特點(diǎn)。它們通常用于科研目的，不適用于臨床診斷或治療。

H22小鼠肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)方法和步驟如下：

培養(yǎng)基準(zhǔn)備：通常使用RPMI-1640培養(yǎng)基，加入10%的優(yōu)質(zhì)胎牛血清和1%的雙抗。

培養(yǎng)條件：在37攝氏度的培養(yǎng)箱中，保持95%的空氣和5%的二氧化碳，濕度為70%-80%。

凍存液：凍存液的配方通常是90%血清和10%的二甲基亞砜（DMSO）。

凍存方法：將細(xì)胞沉淀消化并離心后，加入配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞，然后轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存。

復(fù)蘇方法：將凍存管在37℃水浴中迅速完全融化，然后轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管中離心，最后用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并接種到新的培養(yǎng)瓶中。

H22小鼠肝癌細(xì)胞

在使用H22小鼠肝癌細(xì)胞時(shí)，需要注意以下幾點(diǎn)：

凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：將凍存管在37℃水浴中迅速完全融化，然后轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管中離心，最后用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并接種到新的培養(yǎng)瓶中。

細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí)，可以進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代時(shí)可以通過(guò)向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。

運(yùn)輸和保存：凍存細(xì)胞通常通過(guò)干冰運(yùn)輸，并在收到后立即復(fù)蘇或轉(zhuǎn)移到液氮中保存。凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后應(yīng)及時(shí)復(fù)蘇一管檢查凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案。

培養(yǎng)操作：細(xì)胞培養(yǎng)需要在生物安全柜臺(tái)中進(jìn)行操作，并嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。在培養(yǎng)液中加入適量青霉素-鏈霉素溶液以防止可能的細(xì)菌污染。

法規(guī)遵守：接收、處理、保存、丟棄及使用細(xì)胞時(shí)，要遵守相關(guān)法律法規(guī)，充分考慮可能存在的風(fēng)險(xiǎn)和責(zé)任，采取適當(dāng)?shù)陌踩吞幚泶胧┍M量降低對(duì)健康或環(huán)境的危害

應(yīng)用^[4][5]

H22小鼠肝癌細(xì)胞可以用于益氣解毒方含藥血清對(duì)小鼠肝癌H22細(xì)胞體外增殖的影響

本實(shí)驗(yàn)采用血清藥理學(xué)方法觀察益氣解毒中藥對(duì)體外培養(yǎng)的H22小鼠肝癌細(xì)胞增殖的影響,探討益氣解毒中藥在抗肝癌治療中的作用機(jī)制,為肝癌的中醫(yī)藥治療開(kāi)辟一條新的路徑。

方法:取健康大鼠10只,連續(xù)4天以1.25g/ml生藥的濃度將益氣解毒方提取液按10ml/kg的劑量灌胃,于末次給藥后1小時(shí)以0.9%戊巴比妥鈉5ml/kg腹腔注射麻醉,無(wú)菌條件下腹主動(dòng)脈采血,離心、滅活、分裝、-80℃保存?zhèn)溆?以相同方法連續(xù)4天等劑量生理鹽水灌胃,制備陰性對(duì)照組血清。

將體外培養(yǎng)的H22小鼠肝癌細(xì)胞分成5組:陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(氟尿嘧啶)、益氣解毒中藥高、中、低劑量組。①經(jīng)倒置顯微鏡觀察各組含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的H22小鼠肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)及形態(tài)的影響;②通過(guò)MTT法、CCK-8法檢測(cè)含藥血清對(duì)H22細(xì)胞增殖抑制的影響;③通過(guò)流式細(xì)胞儀法檢測(cè)含藥血清對(duì)H22細(xì)胞生長(zhǎng)周期抑制的影響;④采用RT-PCR方法研究含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的H22小鼠肝癌細(xì)胞增殖抑制的細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的影響。

結(jié)果:益氣解毒中藥含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的H22小鼠肝癌細(xì)胞的增殖在不同濃度均產(chǎn)生一定的抑制作用。①對(duì)體外培養(yǎng)的H22小鼠肝癌細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)狀態(tài)具有抑制作用;②對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠肝癌H22細(xì)胞增殖有抑制作用,對(duì)細(xì)胞的抑制率增高;③對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠肝癌H22細(xì)胞生長(zhǎng)周期有抑制作用,主要表現(xiàn)在對(duì)細(xì)胞G0/G1期的抑制;④對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠肝癌H22細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白有一定影響,使Bcl-2表達(dá)下調(diào),Bax表達(dá)上調(diào)。

結(jié)論:通過(guò)實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)益氣解毒中藥含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)H22小鼠肝癌細(xì)胞的增殖具有抑制作用。作用的機(jī)制可能與通過(guò)影響H22小鼠肝癌細(xì)胞分裂周期的G0/G1期和調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)有關(guān)。

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