簡(jiǎn)述
金合歡素又名5,7-二羥基-4'-甲氧基黃酮，是一種廣泛存在于自然界的天然黃酮類化合物，分子式和分子量分別為C16H12O5，284.26，表現(xiàn)為黃色粉末。金合歡素可以從金合歡樹、洋槐樹、大薊、飛機(jī)草、密蒙花、菊花中提取純化，多用于醫(yī)學(xué)研究和化妝品行業(yè)。目前發(fā)現(xiàn)金合歡素具有多重生物活性，如抗氧化、抗炎抑菌、抗骨質(zhì)疏松、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)心臟和神經(jīng)系統(tǒng)等功效，可能對(duì)人類的健康有極大幫助[1]。
性質(zhì)研究
保護(hù)腦缺血再灌注損傷
為探討金合歡素調(diào)節(jié)Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)/NOD樣受體蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)信號(hào)通路對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制。將Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組，金合歡素低劑量組，金合歡素高劑量組，尼莫地平組，每組10只。除假手術(shù)組外，采用改進(jìn)縫合方法建立大腦中動(dòng)脈閉塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型，建模24 h后評(píng)估各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分和腦梗死體積。采用ELISA法檢測(cè)腦組織白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)，腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)，丙二醛(malondialdehyde,MDA)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量。采用Western blot法檢測(cè)大鼠腦組織中B淋巴細(xì)胞瘤-2(B-cell lymphonoma-2,Bcl-2)，Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)及TLR4/NLRP3信號(hào)通路相關(guān)蛋白(TLR4,p-NF-κB/NF-κB,NLRP3,pro-caspase-1,cleaved caspase-1,pro-IL-1β,cleaved IL-1β)的表達(dá)水平。蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色觀察缺血區(qū)腦組織病理學(xué)變化。結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分，腦梗死體積以及腦組織IL-1β，IL-6，TNF-α，MDA水平均顯著升高(P<0.05)，而腦組織SOD，GSH水平均顯著降低(P<0.05)。與模型組比較，金合歡素低，高劑量組和尼莫地平組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分，腦梗死體積以及腦組織IL-1β，IL-6，TNF-α，MDA水平均顯著降低(P<0.05)，而腦組織SOD，GSH水平均顯著升高(P<0.05)。與假手術(shù)組相比，模型組腦組織中Bax，TLR4，p-NF-κB/NF-κB，NLRP3，pro-caspase-1，cleaved caspase-1，pro-IL-1β，cleaved IL-1β蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)(P<0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.05)。與模型組相比，金合歡素低，高劑量組和尼莫地平組腦組織中Bax，TLR4，p-NF-κB/NF-κB，NLRP3，pro-caspase-1，cleaved caspase-1，pro-IL-1β，cleaved IL-1β蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)(P<0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05)。綜上，金合歡素可通過調(diào)節(jié)TLR4/NLRP3信號(hào)通路，抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，實(shí)現(xiàn)對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠的保護(hù)作用[2]。
提高癌細(xì)胞藥物敏感性
以某醫(yī)院采用金合歡素，順鉑(DDP)或聯(lián)合用藥作用于人卵巢癌SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得出結(jié)論，金合歡素可提高卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，其機(jī)制可能與抑制ABCA3的表達(dá)增加細(xì)胞內(nèi)DDP藥物累積有關(guān)[3]。
抑制骨肉瘤細(xì)胞生長(zhǎng)
實(shí)驗(yàn)研究金合歡素（ACA）在體外和體內(nèi)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞的影響及機(jī)制。方法：體外培養(yǎng)人骨肉瘤細(xì)胞，分別給予不同濃度的ACA處理，結(jié)晶紫染色、MTT實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖，F(xiàn)CM檢測(cè)細(xì)胞周期，Hoechst染色和FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡，劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲。用同樣濃度的ACA處理人正常細(xì)胞，MTT實(shí)驗(yàn)、FCM檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡。WB檢測(cè)相關(guān)蛋白水平。用β-catenin過表達(dá)病毒(Ad R-β-catenin)和JNK抑制劑(SP600125)分別與ACA聯(lián)合處理骨肉瘤細(xì)胞，觀察挽救效果。構(gòu)建骨肉瘤的裸鼠股骨原位成瘤模型，HE染色和IHC分析ACA在體內(nèi)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的作用。結(jié)果：結(jié)晶紫染色、MTT實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)和FCM結(jié)果表明，ACA可抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖，并將MG63細(xì)胞阻滯在G2/M期，且增殖相關(guān)蛋白(PCNA、Cyclin D1、c-Myc)的蛋白水平下降。Hoechst染色和FCM結(jié)果表明，ACA可促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的凋亡，且抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白水平下降，促凋亡蛋白(Bax、Bad)、凋亡標(biāo)志蛋白(c-Caspase3、c-PARP)的蛋白水平升高。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ACA可抑制骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，且MMP-2/7/9、Snail、Vimentin和N-cadherin的蛋白水平下降，E-cadherin的蛋白水平升高。同時(shí)，磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β(ser9))、β-catenin蛋白水平下降，磷酸化JNK(p-JNK)蛋白水平升高。MTT實(shí)驗(yàn)、FCM結(jié)果表明，ACA對(duì)正常細(xì)胞的增殖、凋亡無明顯影響。Ad R-β-catenin和SP600125處理后，ACA對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的作用可部分逆轉(zhuǎn)。小鼠體內(nèi)骨肉瘤的惡性程度和肺轉(zhuǎn)移均被ACA有效抑制，且腫瘤組織的PCNA、Bcl-2、β-catenin蛋白水平下降，E-cadherin、p-JNK蛋白水平升高。根據(jù)以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出結(jié)論：金合歡素（ACA）在體外可抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，并促進(jìn)其凋亡，但對(duì)正常細(xì)胞的增殖、凋亡影響很小，ACA在體內(nèi)可抑制骨肉瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。其分子機(jī)制可能與下調(diào)Wnt/β-catenin和上調(diào)JNK信號(hào)通路活性有關(guān)[4]。
檢測(cè)方法
采用高效薄層色譜掃描法(HTLCS)可以同時(shí)測(cè)定滁菊中木犀草素、芹菜素和金合歡素的含量。方法：采用硅膠GF254高效薄層板條帶點(diǎn)樣，以甲苯：乙酸乙酯∶甲酸∶水=17∶7∶3∶2上層溶液為展開劑，上行展開，于365nm波長(zhǎng)下進(jìn)行直線掃描，測(cè)定滁菊中的木犀草素、芹菜素、金合歡素的含量。結(jié)果：分別在0.066 1～0.335 2μg(r=0.999 9)、0.068 4～0.333 8μg(r=0.997 9)、0.064 0～0.334 2μg(r=0.995 2)范圍內(nèi)，木犀草素、芹菜素、金合歡素線性關(guān)系良好，平均回收率分別為99.9%、100.65%、101.3%，RSD分別為1.55%、1.41%、1.64%。結(jié)論：以HTLCS為質(zhì)量控制方法，建立了一種簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的藥物檢測(cè)方法[5]。
應(yīng)用
從懷菊花中提取的金合歡素可以應(yīng)用于制備雌激素樣藥物的應(yīng)用。將懷菊花用丙酮組織破碎提取兩次，合并濾液，低溫減壓濃縮得總浸膏。總浸膏用水分散溶解，用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇進(jìn)行萃取，取干燥后的乙酸乙酯部位，以乙酸乙酯溶解，硅膠拌勻后蒸干，硅膠柱層析，洗脫液旋干水溶上Toyopearl HW40，依次用水及不同比例的含水甲醇梯度洗脫，洗脫部分依次上sephadexLH20，ODS，Silica gel，MCL Gel CHP20柱，結(jié)合制備高效液相和重結(jié)晶的方法分離純化，得懷菊花金合歡素。上述研究首次發(fā)現(xiàn)懷菊花金合歡素在體內(nèi)有雌激素樣作用，且是通過雌激素受體途徑發(fā)揮作用的，開辟了金合歡素的新用途[6]。
參考文獻(xiàn)
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[2]林蘭明,宋征宇,胡瑾.金合歡素調(diào)節(jié)TLR4/NLRP3信號(hào)通路對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠的保護(hù)作用[J].中國(guó)中藥雜志, 2023, 48(22):6107-6114.
[3]彭佳欣,張自輝,洪莉.金合歡素逆轉(zhuǎn)卵巢癌鉑耐藥的機(jī)制研究[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志, 2023, 39(8):842-848.
[4]魏夢(mèng)琪. 金合歡素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的影響及機(jī)制[D].重慶醫(yī)科大學(xué),2023.DOI:10.27674/d.cnki.gcyku.2022.001439.
[5]蔡玉茹,江倩,李灑灑,等.高效薄層色譜掃描法同時(shí)測(cè)定滁菊中木犀草素、芹菜素、金合歡素含量[J].安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào),2019,33(01):51-55.DOI:10.19608/j.cnki.1673-8772.2017.0566.
[6]鄭曉珂,傅陽,克迎迎,等.一種從懷菊花中提取的金合歡素在制備雌激素樣藥物中的應(yīng)用:CN201911087383.X[P].CN110721178A.