精氨酸是人體必需的氨基酸之一，是合成多肽的重要原料。由于精氨酸呈堿性及含有多個官能團，使得研究其性質(zhì)及對多肽合成時不能直接使用，必須對其氨基和側(cè)鏈胍基進行有效的保護，而pbf對酸最敏感，在TFA/H2O體系中常溫就能方便的脫除，因此pbf是應用最為廣泛的精氨酸保護基，因此，開發(fā)一種Fmoc-Pbf-精氨酸的檢測方法具有重要的工業(yè)價值。

檢測體系

醋酸酸性較三氟乙酸弱，且三氟乙酸一般禁用于質(zhì)譜分析，因為三氟乙酸根信號很強，會掩蓋幾乎所有的負離子，甚至污染質(zhì)量分析器?，F(xiàn)有的方法是用三氟乙酸體系測Fmoc-Arg(pbf)-OH有關物質(zhì)，TFA起到類似離子對的作用，一般濃度在0.05-0.1％，過高的濃度，會使溶液偏酸，長時間使用可能影響色譜柱壽命。研究人員用醋酸體系和三氟乙酸體系也做了對比，結(jié)論醋酸體系對檢測Fmoc-Arg(pbf)-OH有關物質(zhì)在分離度，以及保護色譜柱方面更有優(yōu)勢。

檢測步驟

步驟一：將Fmoc-Arg(pbf)-OH和各雜質(zhì)對照品Fmoc-Arg-OH，F(xiàn)moc-β-Ala-OH，F(xiàn)moc-β-Ala-Arg(pbf)-OH，F(xiàn)moc-Arg(pbf)-Arg(pbf)-OH分別溶于乙腈中，得到濃度分別為0.5mg/ml的樣品溶液和雜質(zhì)對照品溶液，以乙腈為空白溶液。

步驟二：吸取Fmoc-Arg(pbf)-OH溶液1ml，各雜質(zhì)對照品溶液各1ml，形成混合溶液。

步驟三：采用ZORBAX ODS 4.6mmx250mm 5μ，設柱溫35℃，波長220nm，進行梯度洗脫。

步驟四：進樣順序及進樣量，先進步驟二的混合溶液10ul，然后再分別進每種單個雜質(zhì)對照品溶液10ul，以便確定混合溶液出峰中對應的雜質(zhì)出峰時間；

步驟五：進以乙腈為空白溶液1針，然后進Fmoc-Arg(pbf)-OH,通過面積歸一法積分，得到純度。

此方法提供的Fmoc-Pbf-精氨酸有關物質(zhì)檢測方法，檢測速度較快，結(jié)果準確，雜質(zhì)分離度好，方法步驟簡單，便于操作，具有廣闊的應用前景。