背景^[1-7]

酸性磷酸酶檢測(cè)試劑盒是一種用于快速、便捷地檢測(cè)細(xì)胞或組織樣品的裂解或勻漿產(chǎn)物的上清液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的酸性磷酸酯酶活性的試劑盒。酸性磷酸酶(Acid Phosphatase)，也稱(chēng)酸性磷酸酯酶，是一種在溶酶體中含量較高的酸性水解酶，被認(rèn)為是鑒定溶酶體亞細(xì)胞組分的標(biāo)志物。酸性磷酸酶是一個(gè)蛋白家族，哺乳動(dòng)物中其分子量從18kD到100kD不等。酸性磷酸酶分為兩類(lèi)，一類(lèi)為酒石酸鹽敏感型，一類(lèi)為氟離子敏感型。溶酶體中的酸性磷酸酶為酒石酸鹽敏感型，而紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中的酸性磷酸酶為氟離子敏感型。

血漿中的酸性磷酸酶活性范圍在2-7.9U/L，血清中酸性磷酸酶的活性范圍在2.5-11.7U/L。精液(semen)中含有高濃度的酸性磷酸酯酶，活力可以達(dá)到87-436KU/L。酸性磷酸酶能在酸性條件下脫去磷酸酯的磷酸基團(tuán).人體內(nèi)存在多種酸性磷酸酶同工酶，它們?cè)谘逯械臐舛瓤梢杂脕?lái)作為診斷相應(yīng)器官的疾病重要參數(shù).前列腺酸性磷酸酶過(guò)高可能暗示前列腺處有腫瘤，而高水平的抗酒石酸酸性磷酸酶則有可能意味著骨癌的風(fēng)險(xiǎn).因此檢測(cè)相應(yīng)組織細(xì)胞中酸性磷酸酶的活性具有重要的意義。

檢測(cè)原理：Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)是一種常用的磷酸酶顯色底物，在酸性條件下，可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。para-nitrophenol(p-nitrophenol)在堿性條件下，呈黃色產(chǎn)物，可以在400-415nm檢測(cè)吸光度。產(chǎn)物黃色越深，說(shuō)明酸性磷酸酶檢活性越高，反之則酶活性越低。據(jù)此通過(guò)比色分析就可以計(jì)算出酸性磷酸酶活性水平。

注意事項(xiàng)：

1.如果希望進(jìn)行酶活性的絕對(duì)定量，進(jìn)行酶反應(yīng)時(shí)必須注意精確計(jì)時(shí)。此時(shí)推薦采用孵育30分鐘等較長(zhǎng)的時(shí)間，以減小操作過(guò)程中的時(shí)間誤差。同時(shí)如果樣品中酶活性較高，則可以預(yù)先適當(dāng)稀釋樣品。

2.樣品溶液中須避免出現(xiàn)各種酸性磷酸酶抑制劑。

3.一管顯色底物配制后需當(dāng)日使用完畢，因此請(qǐng)注意適當(dāng)多準(zhǔn)備一些樣品一起檢測(cè)，以避免試劑盒浪費(fèi)。

4.p-nitrophenol溶液對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。反應(yīng)終止液有腐蝕性，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或腐蝕其他物品。

應(yīng)用^[8-9]

酸性磷酸酶檢測(cè)試劑盒可用于酸性磷酸酶法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的增殖狀態(tài)

以細(xì)胞漿中酸性磷酸酶活力和細(xì)胞增殖之間具有緊密關(guān)系為依據(jù),確定細(xì)胞數(shù)目與酸性磷酸酶活力之間的相關(guān)性,建立96孔板微量測(cè)定方法,同時(shí)運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡,確定凋亡細(xì)胞與酸性磷酸酶的關(guān)系,并與噻唑蘭(MTT)方法進(jìn)行靈敏度的比較。結(jié)果在2種肝癌細(xì)胞株(HepG2細(xì)胞和CBRH 7919細(xì)胞)中,酸性磷酸酶的活力與細(xì)胞數(shù)目呈正比關(guān)系,在(0.5～7)×10 3細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)呈直線(xiàn)關(guān)系,二者相關(guān)系數(shù)(CV)達(dá)0.994;在佛波酯(TPA)刺激肝癌細(xì)胞1h后,酸性磷酸酶的活力即顯著上升。

相反在三氧化二砷作用后,酸性磷酸酶的活力即顯著下降,濃度越高,下降越顯著。三氧化二砷作用HepG2細(xì)胞2 4h,凋亡細(xì)胞僅占3.98%,作用CBRH 7919細(xì)胞,在還沒(méi)有出現(xiàn)凋亡時(shí),酸性磷酸酶的活力即已顯著下降。結(jié)論檢測(cè)細(xì)胞的酸性磷酸酶活力可作為細(xì)胞增殖和凋亡的指標(biāo),此方法簡(jiǎn)便、快速,可用于大批量抗腫瘤藥物的篩選。

參考文獻(xiàn)

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