背景^[1-3]

細(xì)菌凍存液是一種專門用于冷凍保存各種常見細(xì)菌的試劑。其有效成分為甘油，具有保護細(xì)菌在低溫冷凍條件下存活的作用。根據(jù)品牌和規(guī)格的不同，細(xì)菌凍存液的保存條件和保存時間也有所差異。一般來說，在-20℃條件下，細(xì)菌凍存液可以保存菌種12個月，而在-70℃或-80℃條件下則可以長期保存。

細(xì)菌凍存液是專門用于保存細(xì)菌的溶液，它可以使細(xì)菌在低溫下長期保持活性。

細(xì)菌凍存液的主要作用是在低溫條件下保護細(xì)菌免受損害，使其能夠在解凍后仍然保持原有的生物學(xué)特性和活性。這種液體通常含有防凍劑和其他添加劑，如DMSO（二甲基亞砜）或甘油，這些成分可以防止細(xì)胞在冷凍過程中因水分結(jié)晶而受損。使用細(xì)菌凍存液時，通常將待保存的細(xì)菌沉淀重懸于凍存液中，然后將其存放在-20℃或-80℃的條件下，以實現(xiàn)短期或長期保存。

此外，在使用細(xì)菌凍存液時，需要遵循一定的操作步驟，以確保細(xì)菌的活性。首先，將細(xì)菌接種于肉湯培養(yǎng)基中，在適宜的溫度下培養(yǎng)至適當(dāng)?shù)纳L階段。然后，將細(xì)菌與等體積的凍存液混合，并分裝到凍存管中。最后，將凍存管放入-20℃或-80℃的冰箱中保存。需要注意的是，凍存液應(yīng)避免反復(fù)凍融，以免影響細(xì)菌的存活率。

細(xì)菌凍存液

使用細(xì)菌凍存液時，需要注意以下幾點：

細(xì)菌凍存液必須在超凈臺內(nèi)使用，以避免雜菌污染。

細(xì)菌凍存液必須與細(xì)菌混勻，否則無法起到在低溫冷凍條件下對細(xì)菌的保護作用。

新鮮的對數(shù)期細(xì)菌凍存效果最好，但非對數(shù)期的或不是新鮮培養(yǎng)的細(xì)菌也可以用細(xì)菌凍存液冷凍保存。

為了安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

總的來說，細(xì)菌凍存液是微生物學(xué)和生物實驗室中不可或缺的試劑，能夠有效地保持細(xì)菌的活性和穩(wěn)定性，為科研和實驗工作提供便利。但使用時也需遵循一定的規(guī)范和注意事項，以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

請注意，不同品牌或類型的細(xì)菌凍存液可能具有不同的成分和使用方法，因此在具體使用時，應(yīng)參考產(chǎn)品說明書或咨詢專業(yè)人士的建議。此外，細(xì)菌凍存液的處理和保存也需遵循相關(guān)生物安全規(guī)定，以防止對環(huán)境和人員造成危害。

應(yīng)用^[4-5]

細(xì)菌凍存液可以用于幽門螺桿菌黏附素BabA蛋白結(jié)合區(qū)特征及其作用分析

對crown區(qū)β折疊中的氨基酸及其之間形成的氫鍵進行分析,在保留黏附相關(guān)空間結(jié)構(gòu)的前提下尋找相對分子量更小的蛋白,本部分體外克隆表達三種蛋白:BabA蛋白(BabA蛋白胞外段,即刪除信號肽部分的全長蛋白)、Crown蛋白(BabA蛋白crown區(qū))、C51蛋白(crown區(qū)截短蛋白)。與Crown蛋白相比,C51蛋白中減少了23個氨基酸,其中11個氨基酸位于β片層中,12個氨基酸位于β片層一側(cè)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)中。通過生物膜干涉技術(shù)分析三種蛋白與受體Lewis b的結(jié)合力,BabA、Crown和C51與Lewis b的結(jié)合親和力(Kd)分別為12.1μM、213μM和241μM,說明三個蛋白均能與Lewisb結(jié)合,Crown和C51蛋白的受體結(jié)合力均低于BabA蛋白。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測三種蛋白對H.pylori J99與AGS細(xì)胞黏附的影響,結(jié)果顯示,BabA和Crown蛋白分別使J99的黏附數(shù)量降低了24.8%(P=0.009)和11.1%(P=0.024),而C51蛋白卻使AGS細(xì)胞表面J99的黏附數(shù)量增加了28.0%(P=0.001)。為了分析出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因,觀察三種蛋白對J99細(xì)菌凝集的影響,結(jié)果顯示在自然狀態(tài)下J99菌株基本呈均勻散在分布,加入C51蛋白后J99明顯凝集呈簇,而BabA和Crown蛋白未引起J99明顯凝集,這種凝集效應(yīng)可能是C51蛋白使AGS細(xì)胞表面J99的黏附數(shù)量增加的原因。實驗室使用細(xì)菌凍存液凍存和傳代菌株可能發(fā)生包括黏附能力及阿莫西林耐藥特征的改變,本研究對凍存前與凍存后的H.pylori進行轉(zhuǎn)錄組分析,發(fā)現(xiàn)下調(diào)基因在膜必需組分(GO:0016021)和質(zhì)膜(GO:0005886)顯著富集,膜蛋白表達水平的變化可能與凍存后H.pylori阿莫西林耐藥性降低有關(guān)。在細(xì)菌凍存液凍存菌株中檢測到多種黏附素表達水平的改變,如SabA、AlpB等,但BabA表達水平未發(fā)生顯著改變,提示以BabA為靶點的抗H.pylori黏附作用的研究中,H.pylori菌株的選擇不受凍存因素的影響。本研究通過組織芯片技術(shù)研究了胃癌病人胃黏膜中BabA受體的分布情況,首次對Crown蛋白(BabA蛋白crown區(qū))、C51蛋白(crown區(qū)截短蛋白)進行克隆表達,比較了三種不同分子量大小的蛋白(BabA、Crown、C51)與受體Lewis b的結(jié)合力,并評價了其對H.pylori與AGS細(xì)胞黏附的影響,增加了對H.pylori的黏附機制的理解,并為基于BabA蛋白的抗H.pylori藥物研究提供了理論基礎(chǔ)。通過轉(zhuǎn)錄組分析了細(xì)菌凍存液凍存可能對幽門螺桿菌的廣泛影響,發(fā)現(xiàn)對阿莫西林的耐藥水平和數(shù)種黏附素的表達水平有顯著影響,但對BabA表達無明顯影響,表明以BabA蛋白為基礎(chǔ)的抗黏附體外研究細(xì)菌-細(xì)胞作用模型具有可行性。

參考文獻

[1]Review:Extragastric diseases and Helicobacter pylori[J].Rinaldo Pellicano;;Gianluca Ianiro;;Sharmila Fagoonee;;Carlo R.Settanni;;Antonio Gasbarrini.Helicobacter,2020

[2]BabA and LPS inhibitors against Helicobacter pylori:pectins and pectin-like rhamnogalacturonans as adhesion blockers.[J].Gottesmann Maren;;Paraskevopoulou Vasiliki;;Mohammed Aymen;;Falcone Franco H;;Hensel Andreas.Applied microbiology and biotechnology,2020

[3]Review:Epidemiology of Helicobacter pylori infection.[J].Leja Mārcis;;Grinberga-Derica Ieva;;Bilgilier Ceren;;Steininger Christoph.Helicobacter,2019

[4]Inhibition of Pathogen Adhesion by Bacterial Outer Membrane-Coated Nanoparticles.[J].Zhang Yue;;Chen Yijie;;Lo Christopher;;Zhuang Jia;;Angsantikul Pavimol;;Zhang Qiangzhe;;Wei Xiaoli;;Zhou Zhidong;;Obonyo Marygorret;;Fang Ronnie H;;Gao Weiwei;;Zhang Liangfang.Angewandte Chemie(International ed.in English),2019

[5]韓秀瑞.幽門螺桿菌黏附素BabA蛋白結(jié)合區(qū)特征及其作用分析[D].中國疾病預(yù)防控制中心,2022.