背景^[1-3]

胰臟星狀細胞（Pancreatic Stellate Cells，胰臟星狀細胞）是胰腺中的一種特殊細胞類型，在胰腺纖維化的過程中扮演著重要角色。胰臟星狀細胞被證實與胰腺纖維化有著密切的關聯(lián)，它們的活化是導致胰腺纖維化的中心環(huán)節(jié)。

在健康狀態(tài)下，胰臟星狀細胞通過調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)（Extracellular Matrix，ECM）的合成和降解來維持胰腺的正常組織結(jié)構(gòu)。然而，當胰腺受到損傷或炎癥的影響時，胰臟星狀細胞會從靜息狀態(tài)轉(zhuǎn)化為活化狀態(tài)，此時的它們會表現(xiàn)出肌成纖維細胞的形態(tài)，并大量分泌細胞外基質(zhì)成分。這導致了胰腺腺泡周圍結(jié)締組織的大量增生，即胰腺纖維化。

此外，胰臟星狀細胞還被發(fā)現(xiàn)具有其他多種功能，如作為前體細胞、免疫細胞和胰腺外分泌介質(zhì)細胞等。在胰腺癌細胞的存在下，胰臟星狀細胞還被證實與其存在緊密的聯(lián)系，有助于腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移。

目前，胰臟星狀細胞已成為研究胰腺纖維化、慢性胰腺炎和胰腺癌等疾病的重要靶點。針對胰臟星狀細胞的活化或抑制因素的研究，以及通過調(diào)節(jié)胰臟星狀細胞的功能來逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化的可能性，都是當前研究的熱點。

胰臟星狀細胞

胰臟星狀細胞系培養(yǎng)操作

1)復蘇胰臟星狀細胞系：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2)胰臟星狀細胞系傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)胰臟星狀細胞系凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應用^[4-5]

胰臟星狀細胞可以用于Hic-5通過NF-κB（p65）/IL-6信號通路參與調(diào)控慢性胰腺炎的機制研究

從組織學和細胞學層面研究胰臟星狀細胞(pancreatic stellate cells,PSCs)中Hic-5對慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)的影響,并探索其對下游通路的表達調(diào)控。探討CP新的治療靶點,為CP的治療提供新的方法和可能的實驗室依據(jù)。

方法:1.對人胰腺組織進行H&E染色、免疫組化和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)等實驗檢測Hic-5在CP患者中的表達情況。

2. 以隨機數(shù)表法將8-12周齡大小的野生型(wild type,WT)和Hic-5敲除(knock out,KO)C57BL/6雄性小鼠分為對照組和模型組,每組5只,共四組。模型組以雨蛙素腹膜內(nèi)注射誘導CP小鼠模型。在動物層面分析Hic-5對CP的影響。通過H&E染色、Masson三色染色和天狼星紅染色分析小鼠胰腺纖維化情況。以酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、免疫組化、WB和實時定量聚合酶鏈式反應(reverse-transcription and quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)等方法檢測小鼠炎性因子、纖維化相關指標和下游通路的變化情況。

3. 分別以膠原酶消化法和密度梯度離心法分離WT和Hic-5 KO小鼠中胰腺腺泡細胞及胰臟星狀細胞。在細胞層面分析Hic-5的表達情況及對PSCs活化的影響。以WB法檢測Hic-5在兩種細胞中的表達情況。通過細胞增殖實驗、Transwell實驗和傷口愈合實驗檢測Hic-5對胰臟星狀細胞增殖能力和細胞遷移能力的影響。

4. 予不同濃度的雷公藤甲素(NF-κB/p65抑制劑)處理原代PSCs,在細胞層面分析NF-κB/p65對PSCs活化的影響。通過胰臟星狀細胞增殖實驗、Transwell實驗和傷口愈合實驗檢測NF-κB/p65抑制后對細胞增殖能力和遷移能力的影響。

參考文獻

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