背景^[1-3]

HO-8910是一種人源卵巢上皮癌細(xì)胞系，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所進(jìn)行分離和鑒定。這種細(xì)胞系常用于研究卵巢癌的發(fā)生機(jī)制、治療方法和藥物篩選等方面。

HO-8910細(xì)胞的形態(tài)特征為：細(xì)胞呈懸浮生長(zhǎng)，以單層為主；細(xì)胞形態(tài)呈多樣性，包括梭形、圓形或橢圓形；細(xì)胞核呈橢圓形或卵圓形，核漿比較豐富；細(xì)胞質(zhì)呈淡染色，有時(shí)呈微淡嗜復(fù)染色；細(xì)胞大小一致或略有差異，細(xì)胞直徑約為20-25微米。

此外，HO-8910細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境需要空氣、95%的CO2和5%的37℃溫度，使用RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加10%的FBS和1%的P/S。在傳代過程中，需要使用0.25%的胰蛋白酶溶液（含EDTA）進(jìn)行消化，并在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，當(dāng)細(xì)胞變圓有間隙時(shí)即可終止消化。

HO-8910

HO-8910細(xì)胞系培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇HO-8910細(xì)胞系：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)HO-8910細(xì)胞系傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)HO-8910細(xì)胞系凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

HO-8910可以用于扶正抗癌湯含藥血清聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究

從細(xì)胞水平探索中藥復(fù)方扶正抗癌湯聯(lián)合順鉑對(duì)卵巢癌HO-8910細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制。為扶正抗癌湯聯(lián)合順鉑治療卵巢癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

材料與方法:1.觀察不同濃度扶正抗癌湯含藥血清對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞增殖的影響扶正抗癌湯含藥血清的制備:將SPF級(jí)SD大鼠(雄性)20只隨機(jī)分為兩組,每組10只,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開始灌胃,將購(gòu)買的扶正抗癌湯濃縮6倍后,按人等效劑量的9倍予以灌胃,選擇一組大鼠每只灌胃4.05ml濃縮后的扶正抗癌湯,連續(xù)灌胃10天,并標(biāo)記為含藥血清組;剩下的一組大鼠每只灌胃4.05ml生理鹽水,連續(xù)灌胃10天,并標(biāo)記為空白血清組。灌胃第十天時(shí),于給藥后1h,水合氯醛腹腔注射,麻醉后取血,分別制備含藥血清與空白血清冷藏以備用。將人卵巢癌HO-8910細(xì)胞接種于96孔板,再將扶正抗癌湯含藥血清與空白血清按照1:0、1:1、1:3的比例進(jìn)行配比,依次標(biāo)記為高濃度組、中濃度組、低濃度組后分別干預(yù)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞24h,并用MTT(3(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)法進(jìn)行檢測(cè),觀察不同濃度扶正抗癌湯含藥血清對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞增殖的影響。

2. 觀察扶正抗癌湯含藥血清聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞的影響將人卵巢癌HO-8910細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組、扶正抗癌湯含藥血清聯(lián)合順鉑組和順鉑組,并根據(jù)MTT結(jié)果顯示,選取扶正抗癌湯含藥血清最適濃度聯(lián)合順鉑和順鉑分別干預(yù)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞。分別用CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)各組細(xì)胞FAS(凋亡蛋白-1)、FAS-L(FAS配體)表達(dá)情況;Western-blot法檢測(cè)各組細(xì)胞Caspase-3(半胱氨酸蛋白酶-3)、Caspase-8(半胱氨酸蛋白酶-8)蛋白表達(dá)情況。

結(jié)果:1.不同濃度扶正抗癌湯含藥血清對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞增殖的影響從MTT結(jié)果可以看出,扶正抗癌湯含藥血清對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞的增殖具有抑制作用,且高濃度扶正抗癌湯含藥血清干預(yù)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞時(shí)抑制作用最佳(p<0.01)。

3. 扶正抗癌湯含藥血清聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞的影響CCK8檢測(cè)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,各組細(xì)胞OD值(光密度值)均明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01),且扶正抗癌湯聯(lián)合順鉑組與順鉑組細(xì)胞的OD值相比,差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,各組細(xì)胞凋亡率均有上升,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01),扶正抗癌湯聯(lián)合順鉑組與順鉑組細(xì)胞的凋亡率相比,差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01);免疫細(xì)胞化學(xué)法結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,各組細(xì)胞FAS、FAS-L的表達(dá)均有上升,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01),扶正抗癌湯聯(lián)合順鉑組與順鉑組細(xì)胞的FAS、FAS-L表達(dá)之間也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01);

結(jié)論:1.高濃度扶正抗癌湯含藥血清對(duì)人卵巢癌HO-8910細(xì)胞的增殖抑制作用最佳。2.扶正抗癌湯含藥血清聯(lián)合順鉑可以抑制人卵巢癌HO-8910細(xì)胞的增殖,并增加HO-8910細(xì)胞的凋亡。3.扶正抗癌湯含藥血清聯(lián)合順鉑通過上調(diào)HO-8910細(xì)胞中FAS、FAS-L的蛋白表達(dá)水平,使FAS/FAS-L通路活化,進(jìn)一步使Caspase-3、Caspase-8激活,從而促進(jìn)HO-8910細(xì)胞的凋亡。

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