背景^[1-3]

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是從人臍帶組織中分離出來的一種具有自我更新能力和多向分化潛能的細(xì)胞類型。這些細(xì)胞位于臍帶的華通氏膠（Wharton's Jelly）中，是臍帶血管周圍的一種特殊間質(zhì)組織。由于其獨(dú)特的生物學(xué)特性和廣泛的應(yīng)用前景，hUCMSCs已成為再生醫(yī)學(xué)和細(xì)胞治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)研究對(duì)象。

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有多種生物學(xué)特性，包括自我更新、免疫調(diào)節(jié)、抗凋亡和旁分泌功能等。它們可以分化為多種細(xì)胞類型，如成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等。此外，hUCMSCs還具有較低的免疫原性，不易引起免疫排斥反應(yīng)，因此被視為一種理想的細(xì)胞來源用于細(xì)胞治療和再生醫(yī)學(xué)。

在細(xì)胞培養(yǎng)方面，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞通常需要特定的培養(yǎng)基和條件來維持其生長(zhǎng)和活性。這些條件可能包括適當(dāng)?shù)臏囟取穸?、二氧化碳濃度以及含有必要生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基。在傳代培養(yǎng)過程中，hUCMSCs可以保持穩(wěn)定的生長(zhǎng)速度和分化能力。

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)研究中有廣泛的應(yīng)用。它們可以用于研究細(xì)胞分化、發(fā)育和再生機(jī)制，以及評(píng)估不同藥物或治療方法對(duì)細(xì)胞的影響。此外，hUCMSCs還可以作為細(xì)胞治療的種子細(xì)胞，用于修復(fù)受損組織或器官，如治療心肌梗死、腦損傷、糖尿病等疾病。

然而，需要注意的是，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞作為一種細(xì)胞治療產(chǎn)品，在臨床應(yīng)用前需要進(jìn)行嚴(yán)格的安全性和有效性評(píng)估。同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)過程中也需要遵守相關(guān)的生物安全規(guī)定和操作規(guī)程，確?？蒲腥藛T和患者的安全。

Human Umbilical Cord mesenchymal Stem Cells（人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞）

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可以用于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞及其來源外泌體修復(fù)皮膚損傷的機(jī)制研究

利用微載體結(jié)合生物反應(yīng)器,建立了三維立體培養(yǎng)、規(guī)?；瘮U(kuò)增人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的專利技術(shù)。該技術(shù)操作簡(jiǎn)單,效率高,短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增的種子細(xì)胞高達(dá)109以上,避免了因細(xì)胞反復(fù)傳代而導(dǎo)致的間充質(zhì)干細(xì)胞老化、甚至惡變。細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和生物化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn):三維立體培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有與平面培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞相同干細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)水平和增殖能力以及成脂肪、成骨及成軟骨分化潛能。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明:三維立體培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有與平面培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞相類似的促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的能力。在干細(xì)胞移植修復(fù)小鼠皮膚損傷實(shí)驗(yàn)中,我們將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植到正常小鼠的皮膚創(chuàng)面上。由于異種移植存在強(qiáng)烈的免疫反應(yīng),因此移植到小鼠皮膚創(chuàng)面上的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞將會(huì)被小鼠自身的免疫反應(yīng)排斥掉。但與對(duì)照組比較,移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞小鼠皮膚創(chuàng)面愈合率顯著好于對(duì)照組,推測(cè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可能通過旁分泌作用促進(jìn)創(chuàng)面愈合。于是開展了人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞）修復(fù)皮膚創(chuàng)傷的分子機(jī)制研究。

外泌體(Exosomes,Ex)是細(xì)胞通過出芽方式而分泌的納米級(jí)細(xì)胞膜包裹的囊性小泡,含有豐富的m RNA,micro RNA及蛋白質(zhì)等成分。外泌體通過與靶細(xì)胞融合,將其中的內(nèi)含物m RNA,micro RNA和蛋白質(zhì)等成分注入到靶細(xì)胞中,調(diào)控靶細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡。本實(shí)驗(yàn)首先采用超高速離心法從人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中分離出外泌體。透射電鏡檢測(cè)顯示該外泌體直徑約為40-100nm,呈圓形或卵圓形。Western blot顯示該外泌體表達(dá)表面標(biāo)志蛋白CD9及CD63。至此成功地獲得了Human Umbilical Cord mesenchymal Stem Cells（人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞）的外泌體(human unbilical cord mesenchymal stem cell exosomes,huc MSC-Ex)。為了檢測(cè)外泌體是否通過改變表皮細(xì)胞的生物學(xué)行為促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合。

參考文獻(xiàn)

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