背景^[1-3]

Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）是一種特殊類型的神經(jīng)膠質(zhì)細胞，它們的主要功能是支持、保護和營養(yǎng)神經(jīng)元。這些細胞在周圍神經(jīng)系統(tǒng)中特別豐富，圍繞著神經(jīng)元的軸突形成髓鞘，從而幫助神經(jīng)元進行快速、高效的信號傳輸。

在生物醫(yī)學(xué)研究中，Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）被廣泛用作實驗?zāi)Ｐ?，以研究神?jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、損傷修復(fù)和神經(jīng)退行性疾病等。它們可以模擬人體內(nèi)的神經(jīng)膠質(zhì)細胞行為，幫助科學(xué)家們更好地理解神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能。

為了保持Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）的生長和活性，它們需要在特定的培養(yǎng)基和條件下進行培養(yǎng)。這些條件可能包括適當(dāng)?shù)臏囟取穸?、二氧化碳濃度以及含有必要生長因子的培養(yǎng)基。同時，細胞的傳代和凍存也需要遵循一定的操作規(guī)程，以確保細胞的穩(wěn)定性和可靠性。

值得注意的是，Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）可以用于科研實驗，但并不能用于臨床診斷和治療。此外，在使用這些細胞進行實驗時，需要遵守相關(guān)的生物安全規(guī)定和操作規(guī)程，確保實驗人員的安全。

Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）

Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2)Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）可以用于高糖情況下胰島素樣生長因子-1通過neuritin抑制大鼠雪旺細胞凋亡的機制

1、觀察在不同糖濃度培養(yǎng)下Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）中胰島素樣生長因子-1(insulin 1ike growth factor-1,IGF-1)的表達情況,以了解IGF-1對Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）的作用方式。2、觀察IGF-1是否具有改善高糖下Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）凋亡的作用,是否通過影響neuritin的表達而發(fā)揮作用以及其作用機制。

方法:1、Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）中IGF-1的表達情況Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）貼壁培養(yǎng)后分別給予不同糖濃度(5.6、25、50、100、125、150 mM GS)處理48h。按不同濃度分為6組。實驗每組n=3,重復(fù)3次。RT-QPCR檢測IGF-1的表達情況。

2、IGF-1對高糖下Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）生存能力的影響不同濃度IGF-1干預(yù)高糖培養(yǎng)的Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）36h,實驗分為五組:對照組(125mM GS)、干預(yù)組四組(IGF-1:0.1、1、10、100ng/ml+125mM GS)。實驗每組n=3,重復(fù)3次,流式細胞儀檢測凋亡情況、RT-QPCR和western blot檢測Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）中neuritin的表達變化。

3、BAF干預(yù)neuritin基因沉默的Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）的生存情況50μg/mL BAF和/或10ng/ml IGF-1干預(yù)25mM GS培養(yǎng)下neuritin基因沉默Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）24h。實驗分為A、B、C、D、E、F組分別對應(yīng)空白對照組(Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)、空載體組(未攜帶病毒的載體感染Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)、基因沉默組(攜帶neuritin基因沉默慢病毒的載體感染Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)、干預(yù)I組(IGF-1干預(yù)neuritin基因沉默Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)、干預(yù)Ⅱ組(BAF干預(yù)neuritin基因沉默Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)、干預(yù)Ⅲ組(BAF和IGF-1同步干預(yù)neuritin基因沉默Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)。實驗每組n=3,重復(fù)3次,流式檢測細胞凋亡情況。

4、ly294002干預(yù)下Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）的生存情況10μg/mlly294002和/或10ng/mligf-1干預(yù)125mmgs培養(yǎng)下Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）或neuritin基因過表達Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）36h。實驗分為a、b、c、d、e、f、g組分別對應(yīng)對照組(125mmgs)、空載體組(125mmgs+未攜帶病毒的載體感染Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)、基因過表達組(125mmgs+攜帶neuritin基因過表達慢病毒的載體感染Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)、干預(yù)i組(igf-1干預(yù)高糖培養(yǎng)Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)、干預(yù)Ⅱ組(ly294002和igf-1同步干預(yù)高糖培養(yǎng)Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)、干預(yù)Ⅲ組(igf-1干預(yù)高糖培養(yǎng)neuritin基因過表達Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)、干預(yù)Ⅳ組(ly294002和igf-1同步干預(yù)高糖培養(yǎng)neuritin基因過表達Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）)。實驗每組n=3,重復(fù)3次,流式檢測細胞凋亡情況。

結(jié)果:1、igf-1mrna在Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）中有表達,不同糖濃度組組間相比igf-1mrna的表達無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。

2、igf-1對高糖培養(yǎng)scs生存能力的影響高糖培養(yǎng)下用不同濃度igf-1干預(yù)36h,10ng/ml和100ng/ml組細胞凋亡率下降、neuritin基因及蛋白的表達上升,且有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05),但此兩者間相比無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。

3、baf干預(yù)對neuritin基因沉默Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）生存的影響干預(yù)i組細胞凋亡率上升、Ⅱ及Ⅲ組則下降?；虺聊M細胞凋亡率與干預(yù)Ⅱ及Ⅲ組相比均有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)、與干預(yù)i組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05),干預(yù)Ⅱ組與Ⅲ組相比較無統(tǒng)計學(xué)差異。表明igf-1不能改善neuritin低表達Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）的凋亡,而baf能改善neuritin低表達Rat Schwann Cells（大鼠雪旺細胞）的凋亡。

參考文獻

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