背景^[1-3]

大鼠子宮內膜上皮細胞指的是大鼠子宮內膜上皮細胞。子宮內膜是指構成哺乳類子宮內壁的一層，對動情素和孕激素都起反應，因此可隨著性周期（發(fā)情周期、月經周期）發(fā)生顯著的變化。子宮內膜覆蓋著粘膜，由粘膜上皮與其下方的固有層所組成，而粘膜上皮為柱狀上皮、立方上皮或復層柱狀上皮。當動情素分泌時，各上皮細胞將長大、分裂使數(shù)目增多。

大鼠子宮內膜上皮細胞具有一些特性，包括組織來源于實驗動物的正常子宮組織，細胞鑒定顯示廣譜角蛋白（PCK）免疫熒光染色為陽性，經鑒定細胞純度高于90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。在培養(yǎng)條件下，這些細胞以鋪路石狀、不規(guī)則形態(tài)貼壁生長。

大鼠子宮內膜上皮細胞也可以用于研究內膜功能的各種方面，包括激素調節(jié)、細胞信號傳導途徑和細胞分化。

大鼠子宮內膜上皮細胞

大鼠子宮內膜上皮細胞培養(yǎng)操作

1)復蘇大鼠子宮內膜上皮細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2)大鼠子宮內膜上皮細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)大鼠子宮內膜上皮細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應用^[4-5]

大鼠子宮內膜上皮細胞可以用于益氣化瘀方對子宮復舊不全大鼠子宮內膜細胞凋亡及Bcl-2蛋白、Bax蛋白表達影響

探討益氣化瘀方對子宮復舊不全大鼠子宮內膜上皮細胞凋亡及Bcl-2、Bax表達的影響,了解產后子宮內膜發(fā)生、增殖和演變的規(guī)律,為多種產后疾病的預防和治療提供重要的指導依據。

方法：分娩后40只SD大鼠隨機分為五組,每組別含有8只SD雌鼠,分別是：空白組、模型組、新生化顆粒組、益氣化瘀方低劑量組、益氣化瘀方高劑量組。分娩后,將過夜培養(yǎng)(生理鹽水稀釋成1.0×107個/mL)的大腸桿菌,分別對模型組、新生化顆粒組、益氣化瘀方高、低劑量組進行造模,即子宮內接種大腸桿菌,子宮接種量為0.2mL。于造模成功后第一天,分別給予空白組、模型組、新生化顆粒組、益氣化瘀方高、低劑量組連續(xù)7天灌胃處理,第8天腹主動脈采血后,取標本。通過光鏡觀察HE染色各組大鼠子宮切片的病理改變；采用TUNEL法檢測Rat Endometrial Epithelial Cells細胞凋亡及免疫組化Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表達。

結果：(1)光鏡下觀察,模型組大鼠子宮內膜上皮細胞連續(xù)性部分中斷,且子宮內膜部分小血管擴張、充血,上皮細胞壞死脫落,間質疏松水腫,大量的炎性細胞浸潤；新生化組及益氣化瘀方高劑量組子宮內膜連續(xù)性好,無明顯的上皮損傷,未見明顯炎細胞浸潤,間質致密；益氣化瘀低劑量組大鼠子宮內膜可見少量連續(xù)性中斷,內膜上皮損傷較輕,間質較致密,炎細胞少。

(2) 與空白組比較,模型組的大鼠子宮內膜上皮細胞凋亡率明顯升高(P<0.01)；與模型組比較,益氣化瘀方高、低劑量及新生化組大鼠子宮內膜細胞凋亡率普遍降低(P<0.01)；與新生化組比較,益氣化瘀方低劑量組大鼠子宮內膜細胞凋亡率高(P<0.01),益氣化瘀方高劑量子宮內膜細胞凋亡率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

(3) 與空白組比較,模型組Bcl-2表達明顯減少(P<0.01),Bax表達增多(P<0.01)；給藥后,與模型組比較,益氣化瘀方低、高劑量及新生化組Bcl-2表達增多(P<0.01),Bax表達少(P<0.01)；與新生化組比較,益氣化瘀方低劑量組Bcl-2表達減少(P<0.01),Bax表達增多(P<0.01),益氣化瘀方高劑量組Bcl-2表達減少,Bax表達增多,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

結論：益氣化瘀方可能通過上調Bcl-2蛋白表達及下調Bax蛋白的表達,降低大鼠子宮內膜上皮細胞凋亡的發(fā)生,促進子宮內膜增生修復,從而促進產后子宮復舊。

參考文獻

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[2]Stem cells in human normal endometrium and endometrial cancer cells:Characterization of side population cells[J].Kiyoko Kato.Kaohsiung Journal of Medical Sciences,2011(2)

[3]Stem Cells in Human Endometrium and Endometrial Carcinoma[J].Irene Cervelló;;Cristina Mirantes;;Xavier Santamaria;;Xavier Dolcet;;Xavier Matias-Guiu;;Carlos Simón.International Journal of Gynecological Pathology,2011(4)

[4]The Association between Traditional Chinese Dietary and Herbal Therapies and Uterine Involution in Postpartum Women[J].Ming Ho;;Tsai-Chung Li;;Shan-Yu Su.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine,2011

[5]付水冰.益氣化瘀方對子宮復舊不全大鼠子宮內膜細胞凋亡及Bcl-2蛋白、Bax蛋白表達影響[D].湖南中醫(yī)藥大學,2015.