背景^[1-3]

WEHI-231，也被稱(chēng)為WEHI 231或WEHI231，是一種小鼠B淋巴瘤細(xì)胞系。這種細(xì)胞系源于BALB/c x NXB F1小鼠，通過(guò)礦物油注射誘導(dǎo)產(chǎn)生。WEHI-231細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用，特別是在腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、藥物篩選和細(xì)胞治療等領(lǐng)域。

首先，WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞系常被用作研究B細(xì)胞淋巴瘤的模型。由于其具有淋巴瘤的特性，這種細(xì)胞系可用于模擬人體B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)病過(guò)程，從而深入了解淋巴瘤的生物學(xué)特性、發(fā)病機(jī)制和治療靶點(diǎn)。

其次，WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞也常被用于藥物篩選和細(xì)胞治療研究。由于其具有較高的增殖能力和對(duì)多種藥物的敏感性，這種細(xì)胞系可用于測(cè)試新藥物對(duì)淋巴瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性、抗增殖作用或誘導(dǎo)凋亡的能力。此外，WEHI-231細(xì)胞還可作為基因轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞，用于研究基因治療對(duì)淋巴瘤的治療效果。

WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）

WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞可以用于microRNA-29對(duì)器官移植排斥反應(yīng)的調(diào)控作用及其機(jī)制研究

miR-29直接靶向PTEN影響PI3K/AKT通路調(diào)控B細(xì)胞AICD前面的實(shí)驗(yàn),在轉(zhuǎn)基因小鼠GS29來(lái)源的nave B細(xì)胞上證實(shí)了低表達(dá)miR-29能夠促進(jìn)B細(xì)胞的AICD。但原代B細(xì)胞體外難于存活,后續(xù)實(shí)驗(yàn)難于展開(kāi)。故而先選用了公認(rèn)的B細(xì)胞AICD體外模型,即體外以羊抗鼠anti-IgM刺激WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞誘導(dǎo)AICD。轉(zhuǎn)染microRNA-29a/b/c的mimics后WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞的AICD明顯降低,而轉(zhuǎn)染inhibitor后WEHI-231細(xì)胞的AICD明顯增強(qiáng)。這些實(shí)驗(yàn)再次證明了miR-29能夠有效調(diào)控B細(xì)胞的AICD。

對(duì)targetscan網(wǎng)站提供的miR-29的1000多個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行GO分析,發(fā)現(xiàn)這些靶點(diǎn)中有85個(gè)靶點(diǎn)涉及細(xì)胞存活與生長(zhǎng)發(fā)育。再對(duì)這85個(gè)基因,進(jìn)行keggpathway富集分析,選取選取couts比較高的四個(gè)pathway進(jìn)行vanny分析,篩選出兩個(gè)具有廣泛作用的兩個(gè)分子:PTEN與PIK3CA。而后,我們構(gòu)建了PTEN、PIK3CA以及它們突變體的報(bào)告基因用于雙熒光報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),驗(yàn)證靶點(diǎn)。

結(jié)果顯示,miR-29能夠直接靶向PTEN,抑制PTEN 3’UTR報(bào)告基因的活性。而對(duì)于PIK3CA的靶點(diǎn)驗(yàn)證未能得到證實(shí)。后續(xù)我們構(gòu)建了PTEN的質(zhì)粒和siRNA,分別進(jìn)行過(guò)表達(dá)和干擾實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步驗(yàn)證miR-29可通過(guò)PTEN調(diào)控WEHI-231（小鼠B淋巴瘤細(xì)胞）細(xì)胞的AICD。PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)基因一方面是個(gè)明星抑癌基因,另一方面其帶有雙重特異性磷酸酶,能夠使PIP3(phosphatidylinositol-3,4,5-triphosphate,PIP3)脫磷酸化,最終抑制PI3K/AKT通路。而B(niǎo)細(xì)胞的AICD主要涉及三種信號(hào),PLCγ,Ras和PI3K/AKT。故而,我們western蛋白印跡法檢測(cè)了antagomir-29a-3p處理的WEHI-231細(xì)胞中p-AKT水平,發(fā)現(xiàn)p-AKT水平明顯低于對(duì)照組。這一實(shí)驗(yàn)證實(shí)mir-29通過(guò)靶向PTEN影響PI3K/AKT通路。進(jìn)一步研究,我們發(fā)現(xiàn)p-BAD水平明顯降低;抗凋亡分子Bcl-2和Bcl-xl水平亦降低。以上結(jié)果顯示,mir-29通過(guò)靶向PTEN抑制PI3K/AKT信號(hào)通路,導(dǎo)致AKT磷酸化水平降低,影響下游抗凋亡分子Bcl-2和Bcl-xl的表達(dá),最終增強(qiáng)B細(xì)胞的AICD。

參考文獻(xiàn)

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