背景^[1-3]

TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系是一種細(xì)胞系，來源于小鼠的調(diào)節(jié)T細(xì)胞，具有上皮細(xì)胞樣的形態(tài)特征。這種細(xì)胞系通常在貼壁條件下生長，可以通過1:2-1:3的傳代比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)，每周換液2-3次。TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系可以用于免疫學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)等方面的研究，以了解調(diào)節(jié)T細(xì)胞在免疫應(yīng)答、腫瘤發(fā)生和感染等方面的作用和功能。

TH1(輔助T細(xì)胞1型)是一種T細(xì)胞亞型，主要在細(xì)胞免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用。它們通過分泌干擾素-γ(IFN-γ)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)來激活巨噬細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞。

TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系是另一種T細(xì)胞亞型，它們的主要功能是抑制免疫反應(yīng)，防止過度的免疫反應(yīng)或自身免疫反應(yīng)。

TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系是指在特定的實驗條件下，研究者試圖在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生或調(diào)節(jié)的TH1和調(diào)節(jié)T細(xì)胞。這些實驗通常是為了研究這兩種細(xì)胞在特定疾病或條件下的功能和相互作用。

TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系

TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4][5]

TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系可以用于針刺對RA小鼠Th1/Th2相關(guān)細(xì)胞分子和Foxp3表達(dá)的研究

通過觀察針刺對RA小鼠關(guān)節(jié)炎性癥狀的改善情況,檢測針刺后RA小鼠外周血Treg細(xì)胞的表達(dá)及Th1、Th2細(xì)胞因子的分化狀態(tài),探討針刺后Treg細(xì)胞對TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系/Th2細(xì)胞分化格局的影響,以期為針刺改善RA關(guān)節(jié)炎的機理提供依據(jù)。

方法:將24只健康雄性Wistar小鼠隨機分為空白組、模型組和針刺組。模型組、針刺組兩組采用牛Ⅱ型膠原和弗氏佐劑制備類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型,空白組常規(guī)飼養(yǎng)。針刺組選取小鼠雙側(cè)的“腎俞”“足三里”穴運用毫針干預(yù)。每天毫針針刺30分鐘,連續(xù)針刺6天為一療程,共針刺3個療程,每治療一療程結(jié)束后休息1天。余各組同針刺組束縛但不治療。在造模前后、治療前后,即(第1、14、21、42天)分別測量小鼠的體質(zhì)量與足容積、并觀測小鼠的關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)(AI)評分。取膝關(guān)節(jié)組織,用HE染色法,觀察踝關(guān)節(jié)組織形態(tài)學(xué)的變化;采用聯(lián)酶免疫吸附測定法(ELISA)檢測小鼠外周血中TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系、IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α的含量;用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)實驗方法,檢測細(xì)胞中IL-2、IFN-γ、IL-4基因表達(dá)水平;用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測針刺對Treg細(xì)胞標(biāo)記分子Foxp3表達(dá)的影響。

結(jié)果:1.小鼠體質(zhì)量、足容積、AI評分及關(guān)節(jié)滑膜組織病理學(xué)變化:與空白組比較,模型組小鼠體質(zhì)量減輕(P<0.01);足容積明顯提高(P<0.01);AI評分亦提高明顯(P<0.01);關(guān)節(jié)軟骨損傷、滑膜組織炎細(xì)胞侵潤、纖維組織增生皆顯著提高(P<0.01),滑膜細(xì)胞和巨噬細(xì)胞存在增生(P<0.05)。與模型組相比,針刺組小鼠體質(zhì)量增加明顯(P<0.05);足容積減小(P<0.05);AI評分降低(P<0.01);炎細(xì)胞侵潤降低(P<0.05),纖維組織增生明顯減輕(P<0.01)。

2. RA小鼠外周血中TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系、Th2相關(guān)細(xì)胞因子濃度及基因表達(dá)結(jié)果:與空白組比較,模型組外周血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ濃度均增加,IL-4濃度降低(P<0.01);細(xì)胞中IL-2、IFN-γ基因表達(dá)升高(P<0.05),IL-4基因表達(dá)明顯降低(P<0.01);與模型組相比,針刺組外周血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ濃度均較低(P<0.05),IL-4濃度增加(P<0.05);細(xì)胞中IL-2、IFN-γ基因表達(dá)降低(P<0.05),IL-4基因表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。

3. RA小鼠外周血中Treg細(xì)胞標(biāo)記分子Foxp3的表達(dá)結(jié)果:與模型組相比,針刺組CD4+CD25+Foxp3+陽性表達(dá)升高(P<0.01)。

結(jié)論:1.針刺能改善RA小鼠關(guān)節(jié)炎性癥狀,能使小鼠體質(zhì)量的增加,膝關(guān)節(jié)的紅腫消退,AI評分降低,并能減少小鼠膝關(guān)節(jié)組織中炎性細(xì)胞的侵潤和纖維組織的增生,改善滑膜的損傷和骨關(guān)節(jié)的破壞。2.針刺可以降低小鼠血清中Th1炎癥細(xì)胞因子含量及基因表達(dá)、提高Th2標(biāo)志性細(xì)胞因子含量和Treg細(xì)胞標(biāo)記分子Foxp3表達(dá)。由此推測,針刺可能通過刺激Treg細(xì)胞的表達(dá),改善TH1小鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞系/Th2細(xì)胞的分化失衡,減輕膝關(guān)節(jié)的炎癥反應(yīng)。這可能是針刺治療本病的機理組成部分之一。

參考文獻(xiàn)

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