背景^[1-3]

M109小鼠肺癌細(xì)胞系是一種來源于C57BL/6小鼠的肺癌細(xì)胞系，屬于鱗狀細(xì)胞癌。該細(xì)胞系具有高增殖能力、易形成腫瘤球和轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于肺癌相關(guān)研究。

M109小鼠肺癌細(xì)胞系的建立始于1980年代，當(dāng)時(shí)研究人員從一例C57BL/6小鼠肺癌組織中分離出腫瘤細(xì)胞，并成功建立了該細(xì)胞系。目前，M109細(xì)胞系已經(jīng)成為一種常用的肺癌研究模型，被廣泛應(yīng)用于肺癌的發(fā)生機(jī)制、腫瘤生物學(xué)特性、藥物篩選和治療等方面。

M109小鼠肺癌細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)：

高增殖能力：M109細(xì)胞系具有較快的生長速度和較高的增殖能力，可以在體外持續(xù)傳代。

易形成腫瘤球：M109細(xì)胞系在培養(yǎng)過程中容易形成腫瘤球，這是一種由單個(gè)腫瘤細(xì)胞或少數(shù)腫瘤細(xì)胞聚集形成的球狀結(jié)構(gòu)。腫瘤球的形成有助于維持腫瘤細(xì)胞的干細(xì)胞特性和生長信號(hào)通路的激活。

轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)：M109細(xì)胞系具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移能力，可以通過血液或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到其他部位形成轉(zhuǎn)移瘤。

多藥耐藥性：M109細(xì)胞系具有多藥耐藥性，即對(duì)多種化療藥物產(chǎn)生抗性。這使得該細(xì)胞系在藥物篩選和治療研究中具有一定的應(yīng)用價(jià)值。

總之，M109小鼠肺癌細(xì)胞系是一種重要的肺癌研究模型，具有高增殖能力、易形成腫瘤球和轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)。通過深入研究該細(xì)胞系，可以為肺癌的發(fā)生機(jī)制、腫瘤生物學(xué)特性、藥物篩選和治療等方面提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

M109小鼠肺癌細(xì)胞系

M109小鼠肺癌細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇M109小鼠肺癌細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)M109小鼠肺癌細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)M109小鼠肺癌細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

M109小鼠肺癌細(xì)胞系可以用于地塞米松增強(qiáng)FRα介導(dǎo)的環(huán)境敏感納米粒的靶向遞送及其抗腫瘤藥效評(píng)價(jià)

制備一種pH/還原響應(yīng)性FA功能化膠束,在殼寡糖(Chitosan oligosaccharide,CSO)上接枝FA、還原敏感膽固醇(Reduced sensitive cholesterol,CET)及pH敏感2’3-二甲基馬來酸酐(DMMA)得到FA修飾的CET-CSO-DMMA(FCSD)。通過超聲法由FCSD材料包載DOX制備pH/還原響應(yīng)性FA功能化阿霉素(Doxorubicin,DOX)膠束(FCSD/DOX)。

本研究提出一種Dex誘導(dǎo)FRα放大效應(yīng)及免疫抑制聯(lián)合FA功能化阿霉素膠束增加對(duì)腫瘤殺傷的序貫療法。在序貫療法中,一方面,Dex選擇性增加M109小鼠肺癌細(xì)胞系細(xì)胞表而FRα的表達(dá),降低血清免疫球蛋白含量,減弱天然IgM對(duì)FCSD/DOX腫瘤靶向性的影響;另一方面,生理?xiàng)l件下FCSD/DOX表面的負(fù)電荷在腫瘤細(xì)胞外弱酸性(ExtracellularpH,pHc)條件下,電荷翻轉(zhuǎn),促進(jìn)FA功能化DOX膠束的攝取,到達(dá)胞內(nèi)后,胞漿內(nèi)GSH刺激下CET的二硫鍵斷裂,膠束結(jié)構(gòu)破裂,快速釋放所包載的DOX。

結(jié)果表明,序貫療法的抑瘤率為81.01%,與單獨(dú)使用FCSD/DOX相比,對(duì)M109小鼠肺癌細(xì)胞系抑瘤效果明顯增強(qiáng)。因此,我們應(yīng)重新認(rèn)識(shí)地塞米松和FA功能化NDS聯(lián)合對(duì)FRα陽性肺癌患者的序貫療法。

參考文獻(xiàn)

[1]Cancer incidence and mortality in China,2016[J].Zheng Rongshou;Zhang Siwei;Zeng Hongmei;Wang Shaoming;Sun Kexin;Chen Ru;Li Li;Wei Wenqiang;He Jie.Journal of the National Cancer Center,2022

[2]Roles and drug development of METTL3(methyltransferase-like 3)in anti-tumor therapy[J].Xu Pengfei;Ge Raoling.European Journal of Medicinal Chemistry,2022

[3]Folic Acid-Decoratedβ-Cyclodextrin-Based Poly(ε-caprolactone)-dextran Star Polymer with Disulfide Bond-Linker as Theranostic Nanoparticle for Tumor-Targeted MRI and Chemotherapy[J].Yang Huikang;Wang Nianhua;Yang Ruimeng;Zhang Liming;Jiang Xinqing.Pharmaceutics,2021

[4]Matrix Metalloproteinases Shape the Tumor Microenvironment in Cancer Progression[J].Niland Stephan;Riscanevo Andrea Ximena;Eble Johannes Andreas.International Journal of Molecular Sciences,2021(1)

[5]賈昌浩.地塞米松增強(qiáng)FRα介導(dǎo)的環(huán)境敏感納米粒的靶向遞送及其抗腫瘤藥效評(píng)價(jià)[D].蘇州大學(xué),2022.