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毛癬菌通用PCR試劑盒的應(yīng)用

2024/1/22 8:49:46

背景[1-3]

毛癬菌通用PCR試劑盒是一種用于檢測(cè)毛癬菌的生物試劑盒,通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)。以下是該試劑盒的基本信息:

組成:毛癬菌通用PCR試劑盒通常包括PCR反應(yīng)液、酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品等組成部分。

特點(diǎn):該試劑盒具有高特異性、高靈敏度、快速檢測(cè)等特點(diǎn)。通過對(duì)毛癬菌基因組特定片段進(jìn)行擴(kuò)增,可以有效區(qū)分不同種類的毛癬菌,且檢測(cè)限可達(dá)到10ng/ml左右的人基因組DNA。此外,試劑盒還采用了酶標(biāo)板等優(yōu)質(zhì)材料,確保了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性。

用途:毛癬菌通用PCR試劑盒適用于對(duì)各類樣本進(jìn)行毛癬菌檢測(cè),如頭皮屑、皮膚等。該試劑盒可廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域,為皮膚科醫(yī)生、研究人員等提供有力的檢測(cè)工具。

使用方法:使用毛癬菌通用PCR試劑盒時(shí),需要按照說明書的步驟進(jìn)行操作。通常包括樣本處理、PCR擴(kuò)增、酶標(biāo)板檢測(cè)等環(huán)節(jié)。操作簡(jiǎn)便,一般人員經(jīng)過培訓(xùn)即可熟練掌握。

毛癬菌通用PCR試劑盒.png

毛癬菌通用PCR試劑盒

毛癬菌通用PCR試劑盒的操作步驟如下:

1.樣本采集:從患者體內(nèi)采集血液、糞便、組織等樣本,并將其保存在無菌容器中。

2.DNA提?。簩⒉杉降臉颖具M(jìn)行DNA提取,通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應(yīng)保存在-20°C或更低的溫度下。

3.PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備:根據(jù)毛癬菌通用PCR試劑盒說明書的要求,配制PCR反應(yīng)體系,包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反應(yīng):將提取的DNA加入到PCR反應(yīng)體系中,進(jìn)行PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件和時(shí)間根據(jù)試劑盒說明書的要求進(jìn)行設(shè)置。

5.結(jié)果分析:將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè),根據(jù)熒光信號(hào)的出現(xiàn)情況判斷是否存在毛癬菌的感染。

應(yīng)用[4-5]

毛癬菌通用PCR試劑盒可以用于紅色毛癬菌鑒定和種內(nèi)分型

紅色毛癬菌是(Trichophyton rubrum)是皮膚癬菌病最常見的致病真菌,常引起皮膚、毛發(fā)和指趾甲感染。據(jù)統(tǒng)計(jì)可導(dǎo)致皮膚癬菌病中90%的慢性難治性感染。在臨床和流行病學(xué)研究上,不僅快速、準(zhǔn)確的菌種鑒定非常必要,而且確定復(fù)發(fā)和再感染有時(shí)更為必要,但目前依然缺乏特別簡(jiǎn)單而準(zhǔn)確的手段。所以有必要建立一種快速準(zhǔn)確而簡(jiǎn)單的菌種鑒定和種內(nèi)分型的方法。

目的:1.以改良KANE/PISCHER皮膚癬菌鑒定系統(tǒng)對(duì)皮膚癬菌進(jìn)行培養(yǎng)鑒定,建立一種適宜的皮膚癬菌標(biāo)準(zhǔn)化鑒定系統(tǒng)。2.建立一種快速、簡(jiǎn)單、重復(fù)性強(qiáng)的紅色毛癬菌種內(nèi)分型方法。材料和方法:1.用改良KANE/FISCHER皮膚癬菌鑒定系統(tǒng)對(duì)福建沿海某部隊(duì)采取的69株皮膚癬菌和北京大學(xué)第一醫(yī)院真菌中心保藏的皮膚癬菌ATCC株和臨床株13株進(jìn)行培養(yǎng)鑒定。2.對(duì)其中的63株紅色毛癬菌用毛癬菌通用PCR試劑盒擴(kuò)增其核糖體非轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(NTS)的兩個(gè)串聯(lián)重復(fù)亞單位TRS-1和TRS-2區(qū),進(jìn)行種內(nèi)分型。

毛癬菌通用PCR試劑盒結(jié)果:1.改良KANE/FISCHER鑒定系統(tǒng)基本可以快速、準(zhǔn)確、可靠鑒定紅色毛癬菌到種的水平。2.利用TRS-1和TRS-2區(qū)PCR產(chǎn)物的特征性帶型,可將63株紅色毛癬菌分為8型。

結(jié)論:1.改良KANE/FISCHER鑒定系統(tǒng)對(duì)常見的皮膚癬菌能達(dá)到種的鑒定,可作為標(biāo)準(zhǔn)化鑒定方法。對(duì)紅色毛癬菌和須癬毛癬菌的鑒定較傳統(tǒng)的鑒定方法更準(zhǔn)確、更迅速。2.毛癬菌通用PCR試劑盒PCR方法產(chǎn)生的特征性的指紋圖提供了一種快速、穩(wěn)定、簡(jiǎn)便的分子生物學(xué)種內(nèi)分型方法,可應(yīng)用于紅色毛癬菌感染的流行病學(xué)研究。

參考文獻(xiàn)

[1]Phylogeny of the genera Trichophyton using mitochondrial DNA analysis[J].Kensho Nishio;;Masako Kawasaki;;Hiroshi Ishizaki.Mycopathologia,1992(3)

[2]A survey of dermatophytes isolated from human patients in the United States from 1982 to 1984[J].James T.Sinski;;Lee M.Kelley.Mycopathologia,1987(1)

[3]A yeast with linear molecules of mitochondrial DNA[J]..MGG Molecular&General Genetics,1984(3)

[4]The influence of sodium chloride on the growth and production of macroconidia of Trichophyton mentagrophytes[J].Julius Kane;;J.B.Fischer..1973

[5]樊建峰.紅色毛癬菌鑒定和種內(nèi)分型[D].中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院,2003.

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