背景^[1-3]

WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系是一種常用的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系，用于研究肺成纖維細(xì)胞的生理和病理過(guò)程。這種細(xì)胞系具有一些獨(dú)特的特征，使其在科學(xué)研究中有廣泛的應(yīng)用。

首先，WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系具有高度的相似性，可以模擬肺成纖維細(xì)胞在體內(nèi)的行為和功能。這種相似性使得研究人員可以通過(guò)使用這種細(xì)胞系來(lái)研究肺纖維化等疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。

其次，WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系易于培養(yǎng)和操作。這種細(xì)胞系可以在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行培養(yǎng)和繁殖，使得研究人員可以方便地獲得足夠的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。此外，這種細(xì)胞系還易于進(jìn)行基因修飾和藥物篩選等實(shí)驗(yàn)操作。

此外，WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系還可以用于藥物篩選和毒理學(xué)研究。研究人員可以使用這種細(xì)胞系來(lái)評(píng)估新藥對(duì)肺成纖維細(xì)胞的作用，以及研究化學(xué)物質(zhì)對(duì)肺部的毒性影響。這種細(xì)胞系的應(yīng)用有助于加速藥物研發(fā)和毒理學(xué)研究的進(jìn)程。

WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系

WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系可以用于水飛薊賓與姜黃素共載口服納米粒的構(gòu)建及體內(nèi)外性質(zhì)評(píng)價(jià)

以生物表面活性劑槐糖脂(Sophorolipid,SLs)為仿生材料,結(jié)合聚合物和磷脂材料,設(shè)計(jì)口服納米遞藥系統(tǒng),存在克服腸道粘液層屏障,促進(jìn)細(xì)胞攝取,從而提高SLB和CUR的口服生物利用度,增強(qiáng)抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移的效果。

方法:首先制備SLB和CUR共載納米粒(SC-SLPNs),并進(jìn)行單因素考察,確定較佳處方組成。通過(guò)熒光共振能量轉(zhuǎn)移分析、透射電鏡觀察、X射線衍射分析和差式掃描量熱分析,分別對(duì)納米粒形成、形態(tài)以及在載體中的存在形式進(jìn)行表征?？疾霺LPNs在模擬胃液和模擬腸液中的穩(wěn)定性,利用透析袋法考察體外釋藥行為。采用多粒子追蹤分析技術(shù)評(píng)價(jià)SLPNs在豬粘液中的擴(kuò)散能力。通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察SLPNs在小鼠腸道粘液層中的分布情況。以體外Caco-2/HT29-MTX-E12共培養(yǎng)細(xì)胞模型考察SLPNs的細(xì)胞攝取。通過(guò)大鼠口服灌胃給藥研究體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)。通過(guò)派伊爾結(jié)切片定性分析考察納米粒的吸收情況。以高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞4T1細(xì)胞為模型,考察SC-SLPNs對(duì)4T1細(xì)胞增殖的抑制作用。以4T1和WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系為細(xì)胞模型,考察SC-SLPNs抑制乳腺癌細(xì)胞遷移的作用。

結(jié)果:制備的SLPNs的平均粒徑為111.67±3.68 nm,Zeta電位為-12.33±0.42 m V,SLB包封率為96.72±3.58%,載藥量為7.16±0.22%;CUR包封率為96.33±5.71%,載藥量為3.30±0.36%。SLPNs形態(tài)近球形,大小分布較均勻;XRD和DCS結(jié)果揭示SLPNs中SLB和CUR以無(wú)定形或分子狀態(tài)存在;SLPNs在模擬胃液和模擬腸液中,24 h內(nèi)的穩(wěn)定性較好;對(duì)于SC-LPNs體外釋放,SLB和CUR 8 h累積釋放分別為93.09%和42.15%。多粒子追蹤分析結(jié)果表明SLs促進(jìn)納米粒在粘液層中的穿越。4T1和WML2小鼠肺成纖維細(xì)胞系細(xì)胞攝取結(jié)果表明SLs可促進(jìn)Caco-2/HT29-MTX-E12對(duì)納米粒的攝取,且細(xì)胞表面粘液層對(duì)SLPNs攝取阻礙作用較小;入胞動(dòng)力學(xué)結(jié)果與細(xì)胞攝取一致。細(xì)胞水平藥效結(jié)果表明SLs增強(qiáng)納米粒對(duì)于4T1細(xì)胞的毒性作用和抑制4T1細(xì)胞遷移作用。

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