背景^[1-3]

大鼠腎周細胞是一種特殊類型的細胞，主要位于大鼠的腎臟周圍。這種細胞具有多種功能，包括維持腎臟的正常生理功能、調(diào)節(jié)水分和電解質(zhì)的平衡以及參與腎臟的代謝過程等。

大鼠腎周細胞的作用：

維持腎臟的正常生理功能：大鼠腎周細胞可以分泌多種激素和生長因子，如腎素、血管緊張素等，這些激素和生長因子可以調(diào)節(jié)腎臟的功能，維持腎臟的正常生理狀態(tài)。

調(diào)節(jié)水分和電解質(zhì)的平衡：大鼠腎周細胞可以通過分泌抗利尿激素等激素來調(diào)節(jié)腎臟對水分和電解質(zhì)的重吸收，從而維持體內(nèi)水分和電解質(zhì)的平衡。

參與腎臟的代謝過程：大鼠腎周細胞可以分泌多種酶和代謝物，參與腎臟的代謝過程，如尿素循環(huán)、尿酸合成等。

大鼠腎周細胞的形態(tài)特征

大鼠腎周細胞呈長梭形或不規(guī)則形，具有多個突起，胞質(zhì)豐富。在光學顯微鏡下，大鼠腎周細胞的核呈圓形或橢圓形，染色較深，位于細胞的中央或偏位。在電子顯微鏡下，大鼠腎周細胞具有特殊的超微結(jié)構(gòu)，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等。

大鼠腎周細胞

大鼠腎周細胞系培養(yǎng)操作

1)復蘇大鼠腎周細胞系：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2)大鼠腎周細胞系傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)大鼠腎周細胞系凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應用^[4-5]

大鼠腎周細胞可以用于UUO幼鼠腎間質(zhì)纖維化中周細胞轉(zhuǎn)分化趨勢

通過觀察單側(cè)輸尿管結(jié)扎（UUO）模型中大鼠腎周細胞標志物膠原Ⅰ型蛋白（coll1α1）、血小板源性生長因子受體β（PDGFRβ）、硫酸軟骨素蛋白多糖2（NG2）、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）的表達水平的變化趨勢，進而探討周細胞轉(zhuǎn)分化趨勢，同時評價雷公藤多苷治療后的干預效果。

方法：采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎（UUO）模型，將5-6周齡90只雄性幼年SD大鼠，隨機平均分為3組，即假手術(shù)組（行手術(shù)分離但不結(jié)扎左側(cè)輸尿管）、模型組（手術(shù)結(jié)扎左側(cè)輸尿管近腎盂段）和雷公藤治療組。分別在術(shù)后1、2、3、7、14天每組各取6只小鼠處死，用免疫組織化學法檢測周細胞標志物coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA在腎間質(zhì)纖維化過程中的表達水平的變化，探討大鼠腎周細胞在腎間質(zhì)纖維化過程中的轉(zhuǎn)分化趨勢及作用，用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。

結(jié)果：（1）Masson染色：對照組藍色表達主要位于腎小囊、毛細血管周圍和腎小管基膜處，而小管間質(zhì)中幾乎無陽性染色；模型組內(nèi)隨著梗阻時間的延長，藍色陽染面積逐漸增大，藍色程度逐漸加深，與對照組相比各時間點均有顯著性差異（P<0.01）；干預組各時間點腎臟腎間質(zhì)病變程度較模型組為輕，但仍高于對照組（P<0.01）。

（2）免疫組織化學方法檢測腎間質(zhì)coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA表達水平的變化趨勢：①對照組：coll1α1蛋白主要表達于血管旁纖維母細胞、腎小管周細胞、足細胞胞漿，而腎小球系膜細胞、腎小球上皮細胞、血管平滑肌細胞內(nèi)無表達，各時間點無顯著性差異（P>0.05）；PDGFRβ蛋白表達于各類型細胞胞漿，各時間點無顯著性差異（P>0.05）；NG2蛋白著重表達于系膜細胞及血管平滑肌細胞胞漿，正常時腎小管周細胞無表達，各時間點無顯著性差異（P>0.05）；α-SMA蛋白表達于血管平滑肌細胞胞漿，正常時腎小管周細胞無表達，各時間點無顯著性差異（P>0.05）；②模型組：coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA蛋白隨著試驗時間的延長，表達強度逐漸增強，表達范圍增寬，且逐漸向近髓處擴散，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；③模型干預組：coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA蛋白的表達各時間點明顯低于模型組，但高于對照組，各時間點比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。

結(jié)論：在UUO腎間質(zhì)纖維化早期腎間質(zhì)內(nèi)coll1α1、PDGFRβ、NG2、α-SMA表達上調(diào)，提示UUO腎間質(zhì)纖維化過程中大鼠腎周細胞可能發(fā)生了活化、遷移、轉(zhuǎn)分化，闡明了周細胞在腎間質(zhì)纖維化疾病演變中的作用，而雷公藤干預治療后可能一定程度上抑制周細胞的活化及轉(zhuǎn)分化，從而延緩腎間質(zhì)纖維化的發(fā)展與演變。

參考文獻

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[4]Novel insights into pericyte–myofibroblast transition and therapeutic targets in renal fibrosis[J].Fan-Chi Chang;;Yu-Hsiang Chou;;Yi-Ting Chen;;Shuei-Liong Lin.Journal of the Formosan Medical Association,2012(11)

[5]黃力.UUO幼鼠腎間質(zhì)纖維化中周細胞轉(zhuǎn)分化趨勢[D].山西醫(yī)科大學,2014.