背景[1-6]
Agar(瓊脂粉)由海藻中提取的多糖體,是目前世界上用途最廣泛的海藻膠之一。它在食品工業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)、日用化工、生物工程等許多方面有著廣泛的應(yīng)用,瓊脂用于食品中能明顯改變食品的品質(zhì),提高食品的檔次。價(jià)格很高。其特點(diǎn):具有凝固性,穩(wěn)定性,能與一些物質(zhì)形成絡(luò)合物等物理化學(xué)性質(zhì),可用作增稠劑,凝固劑,懸浮劑,乳化劑,保鮮劑和穩(wěn)定劑。瓊脂平板或培養(yǎng)皿用于使用瓊脂和其他營(yíng)養(yǎng)素的混合物提供生長(zhǎng)培養(yǎng)基,其中可以在顯微鏡下培養(yǎng)和觀(guān)察微生物,包括細(xì)菌和真菌。
瓊脂對(duì)許多生物來(lái)說(shuō)是難以消化的,因此微生物生長(zhǎng)不會(huì)影響使用的凝膠并且它保持穩(wěn)定。瓊脂的最有用特性是它的凝點(diǎn)和熔點(diǎn)之間的溫度相差很大。它在水中需加熱至95℃時(shí)才開(kāi)始熔化,熔化后的溶液溫度需降到40℃時(shí)才開(kāi)始凝固,所以它是配制固體培養(yǎng)基的凝固劑。用瓊脂配制的固體培養(yǎng)基,可用以進(jìn)行高溫培養(yǎng)而不熔化,在凝固之前接種時(shí),也不致將培養(yǎng)物燙死。因此,瓊脂是制備各種生物培養(yǎng)基中應(yīng)用最廣泛的一種凝固劑。瓊脂的濃度,通常是液體培養(yǎng)基的1~1.5%。
瓊脂通常作為粉末商業(yè)銷(xiāo)售,其可以與水混合并且在用作生長(zhǎng)培養(yǎng)基之前與明膠類(lèi)似地制備。將其他成分添加到瓊脂中以滿(mǎn)足微生物的營(yíng)養(yǎng)需求。瓊脂糖培養(yǎng)基是多孔的,因此可用于測(cè)量微生物的運(yùn)動(dòng)性和遷移性。凝膠的孔隙率與培養(yǎng)基中瓊脂糖的濃度直接相關(guān),因此可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)選擇不同濃度。常見(jiàn)的鑒定分析包括在營(yíng)養(yǎng)瓊脂塊內(nèi)深處培養(yǎng)生物樣品。
細(xì)胞將嘗試在凝膠結(jié)構(gòu)內(nèi)生長(zhǎng)。在整個(gè)凝膠中,運(yùn)動(dòng)物種將能夠緩慢地遷移,然后可以看到滲透速率,而非運(yùn)動(dòng)物種將僅沿著由侵入性初始樣品沉積引入的現(xiàn)在空路徑顯示生長(zhǎng)。通常用于測(cè)量趨化性和趨化性的另一種設(shè)置利用瓊脂糖下細(xì)胞遷移測(cè)定法,其中在細(xì)胞群和化學(xué)引誘物之間放置一層瓊脂糖凝膠。隨著濃度梯度從化學(xué)引誘物擴(kuò)散到凝膠中,隨后可以使用顯微照相術(shù)觀(guān)察需要不同刺激水平遷移的各種細(xì)胞群,因?yàn)樗鼈冄刂荻认蛏洗┻^(guò)凝膠向著重力隧穿。
瓊脂廣泛用于植物生物學(xué),因?yàn)樗a(bǔ)充有營(yíng)養(yǎng)和維生素混合物,其允許在無(wú)菌條件下培養(yǎng)皿中的幼苗發(fā)芽(假定種子也被滅菌)。擬南芥的營(yíng)養(yǎng)和維生素補(bǔ)充是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)條件下的標(biāo)準(zhǔn)。一般使用Murashige&Skoog(MS)營(yíng)養(yǎng)混合物和Gamborg的B5維生素混合物。1.0%瓊脂/0.44%MS+維生素dH 2 O溶液適合于正常生長(zhǎng)溫度之間的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。當(dāng)使用瓊脂時(shí),在任何生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,重要的是要知道瓊脂的凝固是pH依賴(lài)性的。凝固的范圍在5.4-5.7之間。通常,KOH的應(yīng)用是需要提高pH值在該范圍內(nèi)。一般準(zhǔn)則是每250ml GM約600μl0.1MKOH??梢允褂酶邏焊囊后w循環(huán)對(duì)整個(gè)混合物進(jìn)行滅菌。
應(yīng)用[7][8]
Agar(瓊脂粉)可用于瓊脂糖凝膠電泳:
蛋白質(zhì)和核酸會(huì)根據(jù)pH不同帶有不同電荷,在電場(chǎng)中受力大小不同,因此跑的速度不同,根據(jù)這個(gè)原理可將其分開(kāi)。電泳緩沖液的pH在6~9之間,離子強(qiáng)度0.02~0.05為最適。常用1%的瓊脂糖作為電泳支持物。瓊脂糖凝膠約可區(qū)分相差100bp的DNA片段,其分辨率雖比聚丙烯酰胺凝膠低,但它制備容易,分離范圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離DNA的范圍為0.2-20kb,利用脈沖電泳,可分離高達(dá)10^7bp的DNA片段。
參考文獻(xiàn)
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