背景[1-7]
人解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA KIT是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。利用產(chǎn)生顏色以及顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系來檢測(cè)未知樣品的種類及濃度。
試劑盒包含以下各組分：
（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；
（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；
（3）酶的底物；
(4）陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品（定性測(cè)定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；
（5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；
（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；
（7）酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的最終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。
結(jié)果判定常用的幾種方法
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性；P／N值小于2.1，但大于1.5為可疑；P／N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
注意事項(xiàng)：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
應(yīng)用[8]
人解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA KIT可用于科研試驗(yàn)中人解整合素樣金屬蛋白酶9的濃度檢測(cè)：
ADAM22在前列腺癌中的分布和意義。制備其特異性抗體。判斷細(xì)胞因子對(duì)其調(diào)節(jié)及分子機(jī)理。其對(duì)腫瘤凋亡的影響,從而從新的角度探討前列腺癌的發(fā)病及病理情況,為前列腺癌的診治和預(yù)后建立新的評(píng)判角度。方法:RT-PCR法克隆ADAM22 cDNA,將其胞膜外區(qū)插入載體,誘導(dǎo)表達(dá)并純化,免疫小鼠制備單克隆抗體并利用流式細(xì)胞術(shù)、western blot和ELISA進(jìn)行鑒定。
參考文獻(xiàn)
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[2]Polymorphisms in Genes Involved in Androgen Pathways as Risk Factors for Prostate Cancer[J].Nina Mononen,Johanna Schleutker.The Journal of Urology.2009(4)
[3]Toll-like receptors and their role in carcinogenesis and anti-tumor treatment[J].Anna Wolska,Ewa Lech-Marańda,Tadeusz Robak.Cellular&Molecular Biology Letters.2009(2)
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[7]Rewinding the DISC[J].Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis.2008(1)
[8]朱李兵.人解整合素樣金屬蛋白酶22在前列腺癌中的表達(dá)及其意義探討[D].第四軍醫(yī)大學(xué),2009.