背景^[1-7]

人解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA KIT是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將待測物質(zhì)和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。利用產(chǎn)生顏色以及顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系來檢測未知樣品的種類及濃度。

試劑盒包含以下各組分：

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

（2）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

（3）酶的底物；

(4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）；

（5）結(jié)合物及標本的稀釋液；

（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

（7）酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的最終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

結(jié)果判定常用的幾種方法

1)目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性；P／N值小于2.1，但大于1.5為可疑；P／N小于1.5為陰性。

4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

應(yīng)用^[8]

人解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA KIT可用于科研試驗中人解整合素樣金屬蛋白酶9的濃度檢測：

ADAM22在前列腺癌中的分布和意義。制備其特異性抗體。判斷細胞因子對其調(diào)節(jié)及分子機理。其對腫瘤凋亡的影響,從而從新的角度探討前列腺癌的發(fā)病及病理情況,為前列腺癌的診治和預后建立新的評判角度。方法:RT-PCR法克隆ADAM22 cDNA,將其胞膜外區(qū)插入載體,誘導表達并純化,免疫小鼠制備單克隆抗體并利用流式細胞術(shù)、western blot和ELISA進行鑒定。

參考文獻

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[2]Polymorphisms in Genes Involved in Androgen Pathways as Risk Factors for Prostate Cancer[J].Nina Mononen,Johanna Schleutker.The Journal of Urology.2009(4)

[3]Toll-like receptors and their role in carcinogenesis and anti-tumor treatment[J].Anna Wolska,Ewa Lech-Marańda,Tadeusz Robak.Cellular&Molecular Biology Letters.2009(2)

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[8]朱李兵.人解整合素樣金屬蛋白酶22在前列腺癌中的表達及其意義探討[D].第四軍醫(yī)大學,2009.