背景^[1-7]

Co-IP試劑盒是基于抗體和抗原之間結(jié)合的專一性用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。其原理是細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在許多蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用體被保留下來(lái)，利用目標(biāo)蛋白質(zhì)特異性抗體免疫沉淀，沉淀得到的蛋白質(zhì)復(fù)合體能夠通過(guò)變性凝膠電泳分離開(kāi)來(lái)，以此定性或定量分析幾種蛋白質(zhì)間相互作用力大小。

免疫共沉淀Co-IP(Co-immunoprecipitation)技術(shù)是檢測(cè)蛋白質(zhì)間相互作用的經(jīng)典方法，其以細(xì)胞內(nèi)源性靶蛋白為誘餌，將靶蛋白抗體與細(xì)胞總蛋白進(jìn)行共孵育，形成“結(jié)合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗體-proteinA/G小珠”復(fù)合物，然后將該復(fù)合物純化后進(jìn)行凝膠電泳分離蛋白，應(yīng)用Western blot或者質(zhì)譜技術(shù)鑒定靶蛋白的結(jié)合蛋白。免疫共沉淀的優(yōu)勢(shì)在于該體系是在生理?xiàng)l件下檢測(cè)蛋白質(zhì)之間的相互作用。

免疫共沉淀是當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，細(xì)胞內(nèi)存在的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)之間的相互作用能夠得以保留。因此，用目的蛋白的抗體進(jìn)行免疫沉淀時(shí)，在體內(nèi)能夠與目的蛋白結(jié)合的其它蛋白質(zhì)也能被沉淀下來(lái)。免疫共沉淀主要用于尋找新的相互作用蛋白，同時(shí)也是驗(yàn)證兩種蛋白質(zhì)之間具有相互作用的經(jīng)典方法。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、溫和條件下進(jìn)行蛋白抽提，BCA定量，調(diào)整蛋白濃度

2、樣品預(yù)處理：用Protein A/G Sepharose孵育

3、樣品與IP抗體進(jìn)行孵育

4、洗滌Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并對(duì)免疫復(fù)合物進(jìn)行變性處理

5、沉淀產(chǎn)物SDS—PAGE或者WB鑒定（目前暫無(wú)其它鑒定）

6、Western blot檢測(cè)

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

1.Co-IP Kit里的交聯(lián)劑，可讓抗體與瓊脂糖珠交聯(lián)，洗脫時(shí)只收集誘餌蛋白2.同一個(gè)抗體既可用于免疫沉淀，又可用于WB檢測(cè)；

3.免除WB中抗體輕重鏈的信號(hào)干擾；

4.操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、結(jié)果客觀準(zhǔn)確；

應(yīng)用^[8]

Co-IP試劑盒可用于檢測(cè)蛋白相互作用：

例如在免疫共沉淀與質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)TRIM3相互作用蛋白的要研究中先通過(guò)Co-IP與LC-MS聯(lián)用檢測(cè)TRIM3的相互作用蛋白,后對(duì)檢測(cè)的結(jié)果分析、篩選,再通過(guò)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果,且在宮頸癌和乳腺癌細(xì)胞中探究TRIM3的功能,與質(zhì)譜結(jié)果對(duì)照。該實(shí)驗(yàn)是先進(jìn)行免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP)后進(jìn)行質(zhì)譜(mass spectrometry,MS),這種方法可以確保從生理?xiàng)l件下的細(xì)胞或組織中分離、鑒定靶蛋白和其相互作用蛋白。

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