背景[1-7]
RAP試劑盒用于研究RNA與DNA、RNA及蛋白質(zhì)之間相互作用的實驗。根據(jù)研究對象不同，RAP技術(shù)結(jié)合了高通量測序（RAP-Seq）和質(zhì)譜技術(shù)（RAP-MS）分別研究與目標(biāo)RNA互作的基因和蛋白質(zhì)。RNA反義純化(RNA antisense Purification，RAP)是一種檢測轉(zhuǎn)錄后水平與RNA結(jié)合RNA和蛋白質(zhì)的檢測方法。
該方法是通過設(shè)計生物素或鏈霉親和素探針組，把目標(biāo)RNA拉下來以后，與其共同作用的RNA、蛋白質(zhì)（RBPs）就會附在到磁珠上，最后根據(jù)要求分離RNA、蛋白質(zhì)（RBPs），并開展qPCR、Western Blot或高通量測序、質(zhì)譜進(jìn)一步分析。
RAP技術(shù)是通過設(shè)計生物素或鏈霉親和素探針組，把目標(biāo)RNA拉下來以后，與其共同作用的DNA、RNA或蛋白質(zhì)（RBPs）就會附在到磁珠上，最后把基因做高通量測序，這樣會得到該調(diào)控RNA轉(zhuǎn)錄調(diào)控的下游靶基因。與此同時，RBPs可以開展Western Blot驗證或者M(jìn)S鑒定未知蛋白。
RAP試劑盒組成及試劑配制：
1、酶聯(lián)板（Assay plate）
2、標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液（HRP-avidin Diluent）
6、生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）
8、底物溶液（TMB Substrate）
9、濃洗滌液（Wash Buffer）
10、終止液（Stop Solution）
產(chǎn)品特點：
1.檢驗靈敏度高，穩(wěn)定性好。
2.領(lǐng)先的檢測方法、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好。
注意事項：
1.作標(biāo)準(zhǔn)曲線時，要扣除標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液造成的本底；如果標(biāo)本用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋，也要扣除標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液造成的本底，如果標(biāo)本未用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋，標(biāo)本不需扣除標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液造成的本底。
2.生物素(Biotin anti rat IL-10)和濃縮酶聯(lián)物(HRP)用前應(yīng)離心，使液體位于管底。
應(yīng)用[8]
RAP試劑盒可用于基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的研究：
基因調(diào)控蛋白YEATS domain作為一個新穎而保守的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域家族在從酵母到人的很多生物中發(fā)現(xiàn)。Taf14 YEATS domain呈現(xiàn)一個β三明治式的構(gòu)型。酵母細(xì)胞內(nèi)功能的研究證明在外界的壓力環(huán)境下Taf14 YEATS domain抑制細(xì)胞的生長。
此外, Taf14的C末端與轉(zhuǎn)錄因子Sth1相互作用,而Sth1是RSC蛋白質(zhì)復(fù)合物中必不可少的元件。Taf14N末端含有一個BRCT domain的Rap1在酵母細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著很多作用,如控制端粒的復(fù)制以及參與糖分解和核糖體蛋白基因的激活。通過RAP試劑盒Western blot證明當(dāng)結(jié)合DNA的氨基酸殘基突變后,酵母細(xì)胞內(nèi)的H4K20me2/3的甲基化水平發(fā)生改變。
參考文獻(xiàn)
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[8]張穩(wěn).基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的研究[D].中國科學(xué)技術(shù)大學(xué),2011.