背景[1-7]
反向染色質(zhì)免疫共沉淀試劑盒是用特異的核酸探針捕獲靶DNA片段及與其相結(jié)合的蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)用質(zhì)譜儀檢測,以達到確定靶DNA位點全部相關蛋白質(zhì)的目的.其可對靶DNA位點相關蛋白質(zhì)進行全面、系統(tǒng)地鑒定,特別是尋找已知DNA元件相應的調(diào)節(jié)蛋白的科研試劑盒反向染色質(zhì)免疫共沉淀技術（reverse-Chromatin immunoprecipitation assay，reverse-ChIP）相對于染色質(zhì)免疫共沉淀技術（ChIP），是一種在體內(nèi)狀態(tài)下分析DNA-蛋白質(zhì)相互作用的新方法。
它用特異的核酸探針捕獲靶DNA片段及與其相結(jié)合的蛋白質(zhì)，并用質(zhì)譜儀或Western Blot檢測，以確定靶DNA位點全部結(jié)合蛋白質(zhì)。將細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和DNA交聯(lián)，超聲波將其隨機切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后用用特異的核酸探針捕獲靶DNA片段及與其相結(jié)合的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)用質(zhì)譜儀或Western Blot檢測，以確定靶DNA位點全部相關蛋白質(zhì)。反向染色質(zhì)免疫共沉淀（Reverse-ChIP），是一種游離染色質(zhì)片段蛋白質(zhì)組學技術（Proteomic Sofisolated Chromatinsegments，PICh），利用DNA探針和質(zhì)譜（Mass Spectrometric）體內(nèi)研究染色質(zhì)結(jié)合蛋白。
染色體免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來的方法，也稱結(jié)合位點分析法，在過去十年已經(jīng)成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項技術幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一特定位置會出現(xiàn)何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測體內(nèi)反式因子與DNA的動態(tài)作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。
近年來，這種技術得到不斷的發(fā)展和完善。采用結(jié)合微陣列技術在染色體基因表達調(diào)控區(qū)域檢查染色體活性，是深入分析癌癥、心血管疾病以及中央神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等疾病的主要通路的一種非常有效的工具。
應用[8]
反向染色質(zhì)免疫共沉淀試劑盒可對靶DNA位點相關蛋白質(zhì)進行全面、系統(tǒng)地鑒定，特別是尋找已知DNA元件相應的調(diào)節(jié)蛋白。在發(fā)現(xiàn)、鑒定靶DNA位點相關蛋白質(zhì)和研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用中有重要應用價值。例如在腫瘤抑制蛋白p53DNA結(jié)合結(jié)構域與靶基因相互作用的研究中p53基因在50%的腫瘤當中發(fā)生突變,而這些突變主要發(fā)生在序列特異性的DNA結(jié)合結(jié)構域,突變的p53不能激活下游基因轉(zhuǎn)錄。因此,序列特異性的DNA結(jié)合和轉(zhuǎn)錄激活活性是p53最關鍵的生物學功能。
參考文獻
[1]Easily reversible desthiobiotin binding to streptavidin,avidin,.8.and other biotin-binding proteins:uses for protein labeling,detection,and isolation.Hirsch J D,Eslamizar L,Filanoski B J,et al.Analytical Biochemistry.2002
[2]A SILAC-based DNA protein interaction screen that identifies candidate binding proteins to functional DNA elements.Mittler G,Butter F,Mann M.Genome Research.2009
[3]Biotin-labeled oligonucleotides with extraordinarily long tethering arms.Morocho AM,Karamyshev V,Shcherbinina O,et al.Methods in Molecular Biology.2005
[4]Interaction of HTLV-1Tax and methyl-CpG-binding domain2positively regulates the gene expression from the hypermethylated LTR.Ego T,Tanaka Y,Shimotohno K.Oncegene.2005
[5]Stable isotope labeling by amino acids in cell culture,SILAC,as a simple and accurate approach to expression proteomics.Ong S E,Blagoev B,Kratchmarova I,et al.Molecular Cellular Proteomics.2002
[6]DNA methylation and human disease.Robertson KD.Nature Reviews Genetics.2005
[7]Purification of proteins associated with specific genomic Loci.Dejardin J.,Kingston R E.Cell.2009
[8]趙明明,齊錦生,栗彥寧.Reverse ChIP:研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用的新方法[J].中國生物化學與分子生物學報,2010,26(05):407-410.