背景[1-7]
反向染色質免疫共沉淀試劑盒是用特異的核酸探針捕獲靶DNA片段及與其相結合的蛋白質,蛋白質用質譜儀檢測,以達到確定靶DNA位點全部相關蛋白質的目的.其可對靶DNA位點相關蛋白質進行全面、系統(tǒng)地鑒定,特別是尋找已知DNA元件相應的調節(jié)蛋白的科研試劑盒反向染色質免疫共沉淀技術（reverse-Chromatin immunoprecipitation assay，reverse-ChIP）相對于染色質免疫共沉淀技術（ChIP），是一種在體內狀態(tài)下分析DNA-蛋白質相互作用的新方法。
它用特異的核酸探針捕獲靶DNA片段及與其相結合的蛋白質，并用質譜儀或Western Blot檢測，以確定靶DNA位點全部結合蛋白質。將細胞內的蛋白質和DNA交聯(lián)，超聲波將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段，然后用用特異的核酸探針捕獲靶DNA片段及與其相結合的蛋白質，蛋白質用質譜儀或Western Blot檢測，以確定靶DNA位點全部相關蛋白質。反向染色質免疫共沉淀（Reverse-ChIP），是一種游離染色質片段蛋白質組學技術（Proteomic Sofisolated Chromatinsegments，PICh），利用DNA探針和質譜（Mass Spectrometric）體內研究染色質結合蛋白。
染色體免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于體內分析發(fā)展起來的方法，也稱結合位點分析法，在過去十年已經成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項技術幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一特定位置會出現(xiàn)何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測體內反式因子與DNA的動態(tài)作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。
近年來，這種技術得到不斷的發(fā)展和完善。采用結合微陣列技術在染色體基因表達調控區(qū)域檢查染色體活性，是深入分析癌癥、心血管疾病以及中央神經系統(tǒng)紊亂等疾病的主要通路的一種非常有效的工具。
應用[8]
反向染色質免疫共沉淀試劑盒可對靶DNA位點相關蛋白質進行全面、系統(tǒng)地鑒定，特別是尋找已知DNA元件相應的調節(jié)蛋白。在發(fā)現(xiàn)、鑒定靶DNA位點相關蛋白質和研究DNA-蛋白質相互作用中有重要應用價值。例如在腫瘤抑制蛋白p53DNA結合結構域與靶基因相互作用的研究中p53基因在50%的腫瘤當中發(fā)生突變,而這些突變主要發(fā)生在序列特異性的DNA結合結構域,突變的p53不能激活下游基因轉錄。因此,序列特異性的DNA結合和轉錄激活活性是p53最關鍵的生物學功能。
參考文獻
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