背景^[1-3]

黏蛋白異染染色液(天青A法)是一種用于檢測(cè)組織中黏蛋白的染色液。它通常使用天青A作為染料，可以與黏蛋白結(jié)合并使其呈現(xiàn)藍(lán)色。

黏蛋白是一類(lèi)大分子蛋白質(zhì)，在許多組織和器官中都有分布，包括皮膚、肺、腸道、乳腺等。它們對(duì)于細(xì)胞外基質(zhì)的構(gòu)建和維護(hù)以及細(xì)胞間的粘附和信號(hào)傳遞都起著重要作用。

黏蛋白異染染色液可以通過(guò)染色來(lái)檢測(cè)組織中的黏蛋白含量和分布情況。通過(guò)顯微鏡觀(guān)察染色后的樣品，可以確定不同組織或細(xì)胞中黏蛋白的分布和數(shù)量，從而為疾病的診斷和治療提供有用的信息。

黏蛋白異染染色液(天青A法)

黏液物質(zhì)染色有多種方法，如AB-PAS染色、黏液HID-AB染色、標(biāo)準(zhǔn)阿利新藍(lán)染色等。以上方法大多是利用阿利新藍(lán)(Alcian)屬于陽(yáng)離子染料可與酸性基團(tuán)結(jié)合，也即阿爾辛藍(lán)與組織內(nèi)含有的陰離子基團(tuán)如羧基和硫酸根形成不溶性復(fù)合物這一原理。

黏蛋白染色液(天青A異染法)是利用天青的異染性這一特性，染色后組織或組織成分著染的顏色與染料復(fù)合物的原有顏色明顯不同而且可形成鮮明的對(duì)比。染色后，切片處理對(duì)異染染色的穩(wěn)定性非常重要，宜采用乙醇保存。

黏蛋白異染染色液(天青A法)操作步驟：

1.切片脫蠟至水。

2.黏蛋白染色液(天青A異染法)染色10min，去離子水沖洗5min。

3.梯度乙醇脫水，二甲苯透明，混合封片劑封片。

染色結(jié)果：

酸性黏蛋白和蛋白多糖：紅色至紫色；

背景：藍(lán)色。

應(yīng)用^[4][5]

黏蛋白異染染色液(天青A法)可以用于人前梯度蛋白2與黏蛋白5AC在慢性鼻-鼻竇炎中的表達(dá)及意義

通過(guò)對(duì)比慢性鼻-鼻竇炎伴或不伴鼻息肉患者與正常對(duì)照組中人前梯度蛋白2(AGR2)與黏蛋白5AC(MUC5AC)的病理染色情況及相關(guān)蛋白和mRNA表達(dá)水平的差異,初步討論AGR2在慢性鼻-鼻竇炎(CRS)發(fā)生機(jī)制中的作用;另一方面,通過(guò)對(duì)AGR2和MUC5AC表達(dá)水平的相關(guān)性分析,探討CRS中黏蛋白產(chǎn)生的分子機(jī)制,為AGR2可能參與CRS黏液高分泌的調(diào)控提供佐證,為黏液高分泌相關(guān)疾病的靶向治療提供新的參考。

方法:收集15例伴有鼻息肉的CRS患者的息肉組織,15例不伴鼻息肉的CRS患者下鼻甲黏膜和15例鼻中隔偏曲或鼻外傷病人的下鼻甲黏膜組織,通過(guò)蘇木精-伊紅染色(HE染色)觀(guān)察各組鼻黏膜組織形態(tài)學(xué)改變,采用愛(ài)先藍(lán)-糖原染色(AB-PAS染色)和黏蛋白異染染色液(天青A法)觀(guān)察鼻黏膜上皮杯狀細(xì)胞改變和黏蛋白(MUC)的表達(dá)情況,用免疫組織化學(xué)染色(IHC)與定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)AGR2和MUC5AC在鼻黏膜組織中的表達(dá)。

結(jié)果:1、HE染色結(jié)果顯示,CRSsNP組和CRSwNP組患者與對(duì)照組相比,鼻黏膜上皮增厚,可見(jiàn)杯狀細(xì)胞增生明顯以及鼻黏膜組織中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

2、AB-PAS染色顯示,在所有分析病例中,可見(jiàn)酸性黏蛋白MUC廣泛表達(dá)于上皮的杯狀細(xì)胞中,染色呈現(xiàn)較強(qiáng)的藍(lán)色。對(duì)照組MCU的光密度值為3.98%±1.74%;CRSsNP組MUC的光密度值為14.69%±2.85%;CRSwNP組MUC的光密度值為17.01%±3.62%,與對(duì)照組相比,CRSsNP和CRSwNP組上皮MUC均高表達(dá)(呈顯著藍(lán)色)(均P<0.05),而兩組之間陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

3、黏蛋白5AC染色顯示,MUC5AC在CRSsNP組和CRSwNP組黏膜上皮呈大面積的棕黃色染色,主要位于杯狀細(xì)胞的胞漿內(nèi),而對(duì)照組可見(jiàn)上皮有零散分布的淺黃色著色。對(duì)照組MUC5AC的光密度值為2.78%±1.36%;CRSsNP組MUC5AC的光密度值為16.18%±5.88%;CRSwNP組MUC5AC的光密度值為19.60%±4.26%,CRS兩組分別與對(duì)照組相比結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05);但兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

4、AGR2染色顯示,AGR2在CRSsNP或CRSwNP黏膜上皮胞質(zhì)中呈大量棕褐色著色,對(duì)照組上皮可見(jiàn)零散分布的棕黃色著色。CRSsNP組AGR2的光密度值為20.26%±2.97%;CRSwNP組AGR2的光密度值為23.87%±6.38%,對(duì)照組AGR2的光密度值為3.76%±1.95%;CRS兩組分別與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05),但兩組之間結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

5、qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,所有病例均檢測(cè)到AGR2和MUC5AC的mRNA表達(dá)。CRSsNP組和CRSwNP組AGR2和MUC5A的mRNA表達(dá)水平較正常對(duì)照組均顯著升高,且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。CRSsNP和CRSwNP兩組之間AGR2和MUC5AC的mRNA水平均無(wú)明顯差異(均P>0.05)。

6、將慢性鼻-鼻竇炎伴或不伴鼻息肉的兩組中AGR2和MUC5AC的mRNA表達(dá)量,用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)進(jìn)行分析,結(jié)果顯示無(wú)論在CRSsNP組還是CRSwNP組中,AGR2 mRNA表達(dá)量與MUC5AC mRNA表達(dá)量均存在一種近似線(xiàn)性的關(guān)系(即正相關(guān)性)(r=0.68,r=0.76,均P<0.05);這種關(guān)系結(jié)果提示AGR2基因表達(dá)上調(diào)可能對(duì)MUC5AC的產(chǎn)生起促進(jìn)作用。

結(jié)論:AGR2和MUC5AC在CRS患者鼻黏膜中高表達(dá),且兩者存在線(xiàn)性相關(guān),提示AGR2可能被認(rèn)為是調(diào)節(jié)CRS患者黏液高分泌的治療靶點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1]Procedures to Evaluate Inflammatory and Pathological Changes During Allergic Airway Inflammation..Rao Savita P;RastleSimpson Stephanie;Dileepan Mythili;Sriramarao P.Methods in molecular biology(Clifton,N.J.),2021

[2]Human Neutrophil Elastase Induces MUC5AC Overexpression in Chronic Rhinosinusitis Through miR-146a.Danqing Yan;;Yu Ye;;Jian Zhang;;Junmei Zhao;;Jieqing Yu;;Qing Luo.American Journal of Rhinology&Allergy,2020

[3]Secretion of pro-oncogenic AGR2 protein in cancer.Nurshahirah Ashikin Moidu;;Nisa Syakila A Rahman;;Saiful Effendi Syafruddin;;Teck Yew Low;;M.Aiman Mohtar.Heliyon,2020

[4]Calcium-activated chloride channel regulator 1(CLCA1):More than a regulator of chloride transport and mucus production.Cong-Lin Liu;;Guo-Ping Shi.World Allergy Organization Journal,2019

[5]王娜.人前梯度蛋白2與黏蛋白5AC在慢性鼻-鼻竇炎中的表達(dá)及意義[D].山西醫(yī)科大學(xué),2022.