成人免费xx,国产又黄又湿又刺激不卡网站,成人性视频app菠萝网站,色天天天天

猴(NHP)單克隆抗體制備服務(wù)

2020/1/16 7:56:08

背景[1-6]

猴(NHP)單克隆抗體制備服務(wù)是利用噬菌體展示抗體庫構(gòu)建和篩選技術(shù)分離到了大量的針對(duì)不同靶點(diǎn)的NHP單克隆抗體。與嚙齒類動(dòng)物相比,猴屬于大型動(dòng)物且具有和人類相近的遺傳背景,使其成為基礎(chǔ)和應(yīng)用研究中非常關(guān)鍵的非人靈長類(NHP)模型動(dòng)物。猴(NHP)單克隆抗體制備服務(wù)不但可以為客戶解決了抗體研發(fā)中的難題,同時(shí)也可以為客戶的治療用途提供了大量有價(jià)值的抗體,并且開辟了抗體生產(chǎn)的新途徑。

噬菌體展示技術(shù)流程:

1.ScFv基因庫的獲得:收集目標(biāo)抗體宿主的免疫細(xì)胞,提取細(xì)胞總RNA;反轉(zhuǎn)錄后,使用多對(duì)引物分別擴(kuò)增抗體基因VH和VL,純化回收VH和VL片段后,使用Linker引物將全套VH和VL基因隨機(jī)拼接成ScFv基因庫;

2. ScFv基因庫轉(zhuǎn)化大腸桿菌:將全套 ScFv 基因片段連接至pCANTAB5e載體,隨后電轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1;同時(shí)鑒定ScFv基因庫庫容(及基因的插入率);

3.噬菌體ScFv抗體庫的構(gòu)建:將輔助噬菌體M13K07加入到轉(zhuǎn)入了ScFv抗體基因的,生長至對(duì)數(shù)生長期的大腸桿菌中進(jìn)行噬菌粒拯救;培養(yǎng)過夜后,離心收集上清即獲得噬菌體ScFv抗體庫;

4.抗體庫的滴度測定:取少量上述獲得的噬菌體ScFv抗體庫,梯度稀釋后進(jìn)行噬斑培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),觀察噬斑生長情況以判斷噬菌體ScFv抗體庫的滴度;

5. 噬菌體抗體庫的富集篩選:使用靶標(biāo)抗原包被酶聯(lián)板,加入噬菌體抗體進(jìn)行孵育,隨后進(jìn)行洗板、洗脫;將洗脫下來的噬菌體抗體進(jìn)行中和后,再次感染細(xì)菌,并進(jìn)行第二輪的淘洗;共進(jìn)行3輪淘洗,每一輪洗脫后都進(jìn)行滴度測定;最后一輪篩選時(shí),設(shè)BSA包被的對(duì)照組以確定是否富集了大量抗BSA的噬菌體抗體。

噬菌體展示抗體庫構(gòu)建流程:

1. 免疫細(xì)胞收集,總RNA提取,反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。

2. 以以上cDNA為模板,PCR擴(kuò)增抗體基因片段,并連接至載體(例如:pComb3或pCANTAB5e載體)。

3. 將已構(gòu)建好的載體電轉(zhuǎn)化至大腸桿菌菌株。

4. (1)以上轉(zhuǎn)化菌株復(fù)蘇后,梯度稀釋,并涂布平板,計(jì)算陽性克隆數(shù);(2)挑選10個(gè)陽性單克隆,提取質(zhì)粒后,進(jìn)行酶切驗(yàn)證;(3)通過陽性克隆數(shù)和酶切驗(yàn)證的結(jié)果,計(jì)算抗體庫庫容。

5. 通過輔助噬菌粒拯救獲得噬菌體展示抗體庫。

應(yīng)用[7][8]

1.用于猴單克隆抗體的相關(guān)研究

例如在利用單細(xì)胞PCR從免疫后中國獼猴篩選H7N9高親和力中和抗體的實(shí)驗(yàn)中需要用ELISA法檢測抗原抗體親和力。而H7N9高親和力猴單克隆抗體的制備就需要用猴(NHP)單克隆抗體制備服務(wù)來縮短抗體的制備時(shí)間。

2.用于猴單克隆抗體的相關(guān)研究Western Blot試劑盒的生產(chǎn)

參考文獻(xiàn)

[1]Antibody light chain-restricted recognition of the site of immune pressure in the RV144 HIV-1 vaccine trial is phylogenetically conserved[J].Kevin Wiehe,David Easterhoff,Kan Luo,Nathan I.Nicely,Todd Bradley,Frederick H.Jaeger,S.Moses Dennison,Ruijun Zhang,Krissey E.Lloyd,Christina Stolarchuk,Robert Parks,Laura L.Sutherland,Richard M.Scearce,Lynn Morris,Jaranit Kaewkungwal,Sorachai Nitayaphan,Punnee Pitisuttithum,Supachai Rerks-Ngarm,Faruk Sinangil,Sanjay Phogat,Nelson L.Michael,Jerome H.Kim,Garnett Kelsoe,David C.Montefiori,Georgia D.Tomaras,Mattia Bonsignori,Sampa Santra,Thomas B.Kepler,S.Munir Alam,M.A.Immunity.2014

[2]Infectivity,Transmission,and Pathology of Human-Isolated H7N9 Influenza Virus in Ferrets and Pigs[J].H.Zhu,D.Wang,D.J.Kelvin,L.Li,Z.Zheng,S.-W.Yoon,S.-S.Wong,A.Farooqui,J.Wang,D.Banner,R.Chen,R.Zheng,J.Zhou,Y.Zhang,W.Hong,W.Dong,Q.Cai,M.H.A.Roehrl,S.S.H.Huang,A.A.Kelvin,T.Yao,B.Zhou,X.Chen,G.M.Leung,L.L.M.Poon,R.G.Webster,R.J.Webby,J.S.M.Peiris,Y.Guan,Y.Shu.Science.2013(6142)

[3]Origin and diversity of novel avian influenza A H7N9 viruses causing human infection:phylogenetic,structural,and coalescent analyses[J].Di Liu,Weifeng Shi,Yi Shi,Dayan Wang,Haixia Xiao,Wei Li,Yuhai Bi,Ying Wu,Xianbin Li,Jinghua Yan,Wenjun Liu,Guoping Zhao,Weizhong Yang,Yu Wang,Juncai Ma,Yuelong Shu,Fumin Lei,George F Gao.The Lancet.2013(9881)

[4]Human infections with the emerging avian influenza A H7N9 virus from wet market poultry:clinical analysis and characterisation of viral genome[J].Yu Chen,Weifeng Liang,Shigui Yang,Nanping Wu,Hainv Gao,Jifang Sheng,Hangping Yao,Jianer Wo,Qiang Fang,Dawei Cui,Yongcheng Li,Xing Yao,Yuntao Zhang,Haibo Wu,Shufa Zheng,Hongyan Diao,Shichang Xia,Yanjun Zhang,Kwok-Hung Chan,Hoi-Wah Tsoi,Jade Lee-Lee Teng,Wenjun Song,Pui Wang,Siu-Ying Lau,Min Zheng,Jasper Fuk-Woo Chan,Kelvin Kai-Wang To,Honglin Chen,Lanjuan Li,Kwok-Yung Yuen.The Lancet.2013(9881)

[5]Isolation of antibody V(D)J sequences from single cell sorted rhesus macaque B cells[J].Christopher Sundling,Ganesh Phad,Iyadh Douagi,Marjon Navis,Gunilla B.Karlsson Hedestam.Journal of Immunological Methods.2012(1-2)

[6]A novel method for making human monoclonal antibodies[J].J.Fraussen,K.Vrolix,P.Martinez-Martinez,M.Losen,E.Meulemans,M.H.De Baets,P.Stinissen,V.Somers.Journal of Autoimmunity.2010(2)

[7]H1N1 Influenza Pandemics:Comparing the Events of 2009 in Mexico with those of 1976 and 1918–1919[J].Carlos Franco-Paredes,Isabel Hernandez-Ramos,Carlos Del Rio,Kelly T.Alexander,Roberto Tapia-Conyer,Jose I.Santos-Preciado.Archives of Medical Research.2009(8)

[8]羅佳.利用單細(xì)胞PCR從免疫后中國獼猴篩選H7N9高親和力中和抗體[D].華南農(nóng)業(yè)大學(xué),2016.

免責(zé)申明 ChemicalBook平臺(tái)所發(fā)布的新聞資訊只作為知識(shí)提供,僅供各位業(yè)內(nèi)人士參考和交流,不對(duì)其精確性及完整性做出保證。您不應(yīng) 以此取代自己的獨(dú)立判斷,因此任何信息所生之風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)自行承擔(dān),與ChemicalBook無關(guān)。文章中涉及所有內(nèi)容,包括但不限于文字、圖片等等。如有侵權(quán),請(qǐng)聯(lián)系我們進(jìn)行處理!
閱讀量:1048 0

歡迎您瀏覽更多關(guān)于猴(NHP)單克隆抗體制備服務(wù)的相關(guān)新聞資訊信息