背景^[1-6]

猴（NHP）單克隆抗體制備服務(wù)是利用噬菌體展示抗體庫構(gòu)建和篩選技術(shù)分離到了大量的針對(duì)不同靶點(diǎn)的NHP單克隆抗體。與嚙齒類動(dòng)物相比，猴屬于大型動(dòng)物且具有和人類相近的遺傳背景，使其成為基礎(chǔ)和應(yīng)用研究中非常關(guān)鍵的非人靈長類（NHP）模型動(dòng)物。猴（NHP）單克隆抗體制備服務(wù)不但可以為客戶解決了抗體研發(fā)中的難題，同時(shí)也可以為客戶的治療用途提供了大量有價(jià)值的抗體，并且開辟了抗體生產(chǎn)的新途徑。

噬菌體展示技術(shù)流程：

1.ScFv基因庫的獲得：收集目標(biāo)抗體宿主的免疫細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA；反轉(zhuǎn)錄后，使用多對(duì)引物分別擴(kuò)增抗體基因VH和VL，純化回收VH和VL片段后，使用Linker引物將全套VH和VL基因隨機(jī)拼接成ScFv基因庫；

2. ScFv基因庫轉(zhuǎn)化大腸桿菌：將全套 ScFv 基因片段連接至pCANTAB5e載體，隨后電轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1；同時(shí)鑒定ScFv基因庫庫容（及基因的插入率）；

3.噬菌體ScFv抗體庫的構(gòu)建：將輔助噬菌體M13K07加入到轉(zhuǎn)入了ScFv抗體基因的，生長至對(duì)數(shù)生長期的大腸桿菌中進(jìn)行噬菌粒拯救；培養(yǎng)過夜后，離心收集上清即獲得噬菌體ScFv抗體庫；

4.抗體庫的滴度測定：取少量上述獲得的噬菌體ScFv抗體庫，梯度稀釋后進(jìn)行噬斑培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，觀察噬斑生長情況以判斷噬菌體ScFv抗體庫的滴度；

5. 噬菌體抗體庫的富集篩選：使用靶標(biāo)抗原包被酶聯(lián)板，加入噬菌體抗體進(jìn)行孵育，隨后進(jìn)行洗板、洗脫；將洗脫下來的噬菌體抗體進(jìn)行中和后，再次感染細(xì)菌，并進(jìn)行第二輪的淘洗；共進(jìn)行3輪淘洗，每一輪洗脫后都進(jìn)行滴度測定；最后一輪篩選時(shí)，設(shè)BSA包被的對(duì)照組以確定是否富集了大量抗BSA的噬菌體抗體。

噬菌體展示抗體庫構(gòu)建流程：

1. 免疫細(xì)胞收集，總RNA提取，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。

2. 以以上cDNA為模板,PCR擴(kuò)增抗體基因片段，并連接至載體(例如：pComb3或pCANTAB5e載體)。

3. 將已構(gòu)建好的載體電轉(zhuǎn)化至大腸桿菌菌株。

4. (1)以上轉(zhuǎn)化菌株復(fù)蘇后，梯度稀釋，并涂布平板，計(jì)算陽性克隆數(shù)；(2)挑選10個(gè)陽性單克隆，提取質(zhì)粒后，進(jìn)行酶切驗(yàn)證;(3)通過陽性克隆數(shù)和酶切驗(yàn)證的結(jié)果，計(jì)算抗體庫庫容。

5. 通過輔助噬菌粒拯救獲得噬菌體展示抗體庫。

應(yīng)用^[7][8]

1.用于猴單克隆抗體的相關(guān)研究

例如在利用單細(xì)胞PCR從免疫后中國獼猴篩選H7N9高親和力中和抗體的實(shí)驗(yàn)中需要用ELISA法檢測抗原抗體親和力。而H7N9高親和力猴單克隆抗體的制備就需要用猴（NHP）單克隆抗體制備服務(wù)來縮短抗體的制備時(shí)間。

2.用于猴單克隆抗體的相關(guān)研究Western Blot試劑盒的生產(chǎn)

參考文獻(xiàn)

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