背景^[1-5]

在后基因組（post-genomics）時代，基因的表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)作為生物功能最直接的執(zhí)行者和體現(xiàn)者，在生物集體的生理及病理中扮演著重要的角色。高通量的蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)可以在上述過程中篩選出具有潛在價值的生物標(biāo)記和靶點。

但是長期以來，大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達分析譜并沒有顯著的提升我們對生物標(biāo)志物的認識，其主要原因是差異蛋白的分析結(jié)果缺乏足夠快速和規(guī)?；尿炞C。為了達到對候選蛋白快速驗證，蛋白質(zhì)互作驗證服務(wù)出一系列蛋白質(zhì)組學(xué)下游驗證服務(wù)，真正做到“一站式蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)”。蛋白質(zhì)間的相互作用構(gòu)成了細胞生化反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)的一個主要組成部分，蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò)與轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)對調(diào)控細胞及其信號有重要意義。

蛋白質(zhì)互作驗證服務(wù)相關(guān)技術(shù)：

1.免疫共沉淀技術(shù)

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。 其基本原理是：細胞裂解液中加入抗體，與抗原形成特異免疫復(fù)合物，經(jīng)過洗脫，收集免疫復(fù)合物，然后進行SDS-PAGE及Western blotting分析。

但這種方法有兩個缺陷：一是兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；二是必須在實驗前預(yù)測目的蛋白是什么，以選擇最后檢測的抗體，所以，若預(yù)測不正確，實驗就得不到結(jié)果，方法本身具有冒險性。

2.pull-down技術(shù)

蛋白質(zhì)相互作用的類型有牢固型相互作用和暫時型相互作用兩種。牢固型相互作用以多亞基蛋白復(fù)合體常見，通過免疫共沉淀(Co-IP) 、Pull-down技術(shù)或Far-western法研究。Pull-down技術(shù)用固相化的、已標(biāo)記的餌蛋白或標(biāo)簽蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-)，從細胞裂解液中釣出與之相互作用的蛋白。通過Pull-down技術(shù)可以確定已知的蛋白與釣出蛋白或已純化的相關(guān)蛋白間的相互作用關(guān)系，從體外傳路或翻譯體系中檢測出蛋白相互作用關(guān)系。

3.酵母雙雜交系統(tǒng)

酵母雙雜交系統(tǒng)是當(dāng)前廣泛用于蛋白質(zhì)相互作用組學(xué)研究的一種重要方法。其原理是當(dāng)靶蛋白和誘餌蛋白特異結(jié)合后，誘餌蛋白結(jié)合于報道基因的啟動子，啟動報道基因在酵母細胞內(nèi)的表達，如果檢測到報道基因的表達產(chǎn)物，則說明兩者之間有相互作用，反之則兩者之間沒有相互作用。將這種技術(shù)微量化、陣列化后則可用于大規(guī)模蛋白質(zhì)之間相互作用的研究。在實際工作中，人們根據(jù)需要發(fā)展了單雜交系統(tǒng)、三雜交系統(tǒng)和反向雜交系統(tǒng)等。此外，酵母雙雜交系統(tǒng)的作用也已擴展至對蛋白質(zhì)的鑒定。

服務(wù)類型^[6][7][8]

1.Western Blot技術(shù)服務(wù)

蛋白質(zhì)印記（western blot）又稱免疫印跡（immunoblotting），是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色，并且通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)，常用于鑒定蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。

2.CoIP技術(shù)服務(wù)

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，用于確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用。其原理是：當(dāng)細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x，那么與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合，也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。

CoIP與質(zhì)譜聯(lián)用的原理是：如果一種目標(biāo)蛋白是某一蛋白復(fù)合物的一部分，利用目標(biāo)蛋白的特異性抗體，就可以對整個蛋白復(fù)合物進行富集，進而利用質(zhì)譜鑒定這個蛋白復(fù)合物中的其他成員。

3.SILAC-based

將SILAC技術(shù)和Co-IP技術(shù)結(jié)合可用于精確定量互作蛋白。其基本原理是通過質(zhì)譜鑒定和分析蛋白質(zhì)相對量來判斷是否是特異性結(jié)合誘餌蛋白，與對照組相比較，當(dāng)敲低或者過表達誘餌蛋白之后，非特異性結(jié)合的蛋白會成對出現(xiàn)且峰強一致，而互作蛋白的含量會相應(yīng)的降低或者升高，通過數(shù)據(jù)差異性分析就可以得到誘餌蛋白互作蛋白信息。

CoIP與質(zhì)譜聯(lián)用的原理是：如果一種目標(biāo)蛋白是某一蛋白復(fù)合物的一部分，利用目標(biāo)蛋白的特異性抗體，就可以對整個蛋白復(fù)合物進行富集，進而利用質(zhì)譜鑒定這個蛋白復(fù)合物中的其他成員。

參考文獻

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