背景[1-3]
月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯簡稱LST培養(yǎng)基，是大腸菌選擇性液體培養(yǎng)基，用于檢測食品、水、奶制品中的大腸菌群和大腸埃希氏菌。
月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯
月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯原理：
大腸菌群時革蘭氏陰性桿菌，能夠快速發(fā)酵乳糖產(chǎn)氣（水不溶性氣體）。更為準確的定義是35°C條件下能夠在LST培養(yǎng)基和BGLB培養(yǎng)基中生長，并且發(fā)酵乳糖產(chǎn)氣的革蘭氏陰性桿菌。在44.5°C條件下，還能夠在EC肉湯中發(fā)酵乳糖產(chǎn)氣的屬于大腸菌群的一個子集——糞大腸菌群。
表面活性劑如膽鹽、蓖麻油酸鈉，一直以來作為抑制成分，用于配制選擇性培養(yǎng)基。十二烷基硫酸鈉（SDS）在大腸菌選擇性培養(yǎng)基中效果，完全阻止革蘭氏陽性菌生長。十二烷基硫酸鹽胰蛋白示肉湯可以在小量接種的情況下支持大腸菌的密集生長并產(chǎn)生大量氣體。該培養(yǎng)基另外一個優(yōu)點是可用于直接檢測吲哚的存在。如果需要，可以在培養(yǎng)后加入指示劑。
向培養(yǎng)基中加入4-甲基傘型酮-β-D-葡糖苷酸（MUG）可以提高檢測大腸埃希氏菌的靈敏度。不產(chǎn)氣的大腸埃希菌菌株也能用MUG鑒別。MUG是一種生熒光化合物。大腸埃希氏菌具有合成Beta-葡萄糖苷酶的能力，水解MUG生成熒光化合物。在366nm波長的紫外燈下，培養(yǎng)基顯熒光，實現(xiàn)大腸埃希氏菌的快速檢測。
月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯用法：
稱取本品35.6克，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝到有倒立發(fā)酵管的20mm×150mm試管中，每管10ml，121℃高壓滅菌15分鐘，備用。
應用[4][5]
月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯可以用于阪崎克羅諾桿菌的檢測及耐酸機制研究
阪崎克羅諾桿菌(Cronobacter sakazakii)是一種可以在人及動物腸道內(nèi)寄生生存的革蘭陰性菌,該菌可以引發(fā)新生兒腦膜炎、壞死性小腸結(jié)腸炎和菌血癥等嚴重疾病,且感染后死亡率高達40%-80%,引起全球的廣泛關注。
研究發(fā)現(xiàn),感染來源主要是受阪崎腸桿菌污染的奶粉,而克羅諾桿菌的傳統(tǒng)分離方法存在一定的缺陷,高效的生物學及分子生物學技術的發(fā)展則對克羅諾桿菌菌種的檢測和分型以及預防和治療阪崎克羅諾桿菌的感染具有重要意義。食源性致病菌的耐酸特性也是其發(fā)揮其致病性的關鍵前提條件之一。目前,國內(nèi)對其酸脅迫應答機制研究還鮮有報道。
首先通過添加萬古霉素、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷、頭孢菌素和蔗糖等物質(zhì)建立了一種優(yōu)于DFI(Druggan-Forsythe-Iversen)和改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(mLST)的克羅諾桿菌分離方法,該方法、DFI和mLST方法對克羅諾桿菌的靈敏度分別為100%、87.5%和87.5%：而特異性分別為88.8%、77.7%和87.5%。然后,基于TaqI單酶切gluB基因片段進行限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析,建立一種能鑒定克羅諾桿菌的同時還可以快速、準確地區(qū)分都柏林克羅諾桿菌(Cronobacter dublinensis),丙二酸鹽陽性克羅諾桿菌(Cronobacter malonaticus),穆汀斯克羅諾菌(Cronobacter muytjensii)和阪崎克羅諾桿菌(Cronobacter sakazakii)的種間特異性分子分型靶標技術。
最后,本文探索性通過菌體接合方法成功建立了阪崎克羅諾桿菌的基因敲除方法,獲得外膜蛋白OmpW突變株△OmpW和谷氧還蛋白GrxB突變株△GrxB,并通過耐酸性、形態(tài)特征和生物膜相關指標變化初步探討OmpW、GrxB在阪崎克羅諾桿菌中耐酸變化中的作用,發(fā)現(xiàn)這兩個基因與該菌的耐酸性有關,為進一步開展OmpW、GrxB在該菌致病中的作用機制提供參考數(shù)據(jù)。
參考文獻
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