制備方法

CN1782068A公開一種枯草芽孢桿菌的制備方法，其特征是：

(1)采樣：將采樣工具及各種采樣容器進(jìn)行滅菌，在豆腐生產(chǎn)工廠附近下水道的淤泥中進(jìn)行多點采樣；

(2)稀釋：將采集的樣品混合均勻，稱取10克樣品，溶解于100mL無菌水中，其中裝有80-100粒玻璃珠，用力搖動10分鐘，靜止一分鐘，用1mL無菌吸管吸取1mL上清液，移入9mL無菌水試管中，徹底搖勻，然后再從9mL的稀釋樣中取出1mL樣品再移入9mL無菌試管中，徹底搖勻，如此依次進(jìn)行稀釋，直至稀釋到10-9；

(3)分離：從上述稀釋的樣品中用0.1mL無菌吸管分別取出0.1mL樣品，移入瓊脂平板培養(yǎng)基中，用無菌三角刮棒，涂布均勻，每個稀釋度做兩個重復(fù)，瓊脂平板培養(yǎng)基的配方：大豆分離蛋白6.0g、葡萄糖3.0g、氯化鈉0.5g、脫脂乳粉4.0g、瓊脂粉1.5g、加入1.6％的溴甲酚綠乙醇溶液1mL、pH7.0，121℃滅菌20分鐘；

(4)培養(yǎng)：將涂布的平板置于37℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24小時，觀察挑菌；

(5)挑菌：將菌落周圍有透明圈的菌落挑入試管斜面中，挑取50個菌落，然后再進(jìn)行二次分離純化，最后得到純培養(yǎng)，從上述50株菌種中選出兩株透明圈者，進(jìn)行紫外線照射誘變；

(6)紫外線誘變初篩：將其中兩株菌分別在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)12小時，取出離心，用無菌水洗滌兩次，再用生理鹽水稀釋，用玻璃珠搖勻打碎，使細(xì)胞數(shù)達(dá)到107，在30W紫外燈下，距離10cm照射6分鐘，紅光下操作，然后涂布于上述瓊脂平板上，避光培養(yǎng)36小時。挑取菌落，移入試管斜面中，挑取50株菌株；

(7)復(fù)篩：將50株菌種逐個進(jìn)行培養(yǎng)、性能測試，從其中篩選出2株性能者，再進(jìn)行誘變篩選，反復(fù)進(jìn)行3次，最后得到良菌種L-B-05進(jìn)行菌種鑒定。

應(yīng)用

一種枯草芽孢桿菌的應(yīng)用方法，其特征是：

以植物蛋白為原料，原料先進(jìn)行預(yù)處理，加水配制成重量百分比濃度為6-18％，調(diào)整PH值為6.0-7.0，然后在121℃高溫下進(jìn)行滅菌處理，冷卻至30-35℃，按重量百分比為5.0-10.0％接入培養(yǎng)成熟的枯草芽孢桿菌L-B-05菌種，通入無菌空氣，進(jìn)行攪拌發(fā)酵，發(fā)酵時保持溫度在35℃±2℃，發(fā)酵周期為24-48小時；發(fā)酵結(jié)束在121℃溫度下進(jìn)行高溫滅活，先進(jìn)行過濾分離或精制，濃縮至25-40Bx，噴霧干燥制成產(chǎn)品。