背景^[1][2][3][4]

NF-κB p65 Rabbit Polyclonal Antibody（NF-κB p65兔多克隆抗體）是將NF-κB p65蛋白對兔進行系統(tǒng)免疫后從兔血中制備的多克隆抗體。NF-κB p65（RELA）參與NF-κB異二聚體形成，核轉(zhuǎn)位和活化的REL相關(guān)蛋白。NF-κB是參與所有類型細胞過程的必需轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物，包括細胞代謝，趨化性等.RELA的磷酸化和乙酰化是NF-κB活化所需的關(guān)鍵翻譯后修飾。

RELA也被證明可以調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，RELA的激活與多種類型的癌癥正相關(guān)。RELA是NF-κB家族的一員，是強化研究中最重要的轉(zhuǎn)錄因子之一。由5個基因編碼的7種蛋白質(zhì)參與NF-κB復(fù)合物，即p105，p100，p50，p52，RELA，c-REL和RELB。[9]如在此復(fù)雜的其他蛋白質(zhì)，RELA包含N-末端REL-同源結(jié)構(gòu)域（RHD），并且還C-端反式激活域（TAD）。

RHD參與DNA結(jié)合，二聚化和NF-κB/REL抑制劑相互作用。另一方面，TAD負責(zé)與基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄復(fù)合物相互作用，包括許多轉(zhuǎn)錄共激活因子，如TBP，TFIIB和CREB-CBP。RELA和p50是NF-κB同源二聚體和異二聚體中最常見的異二聚體復(fù)合物，是參與核轉(zhuǎn)位和NF-κB活化的功能成分。作為NF-κB的原型異二聚體復(fù)合成員，與p50一起，RELA/p65在經(jīng)典NF-κB活化和核轉(zhuǎn)位過程中與細胞質(zhì)和細胞核中的各種蛋白質(zhì)相互作用。

在無活性狀態(tài)下，RELA/p50復(fù)合物主要被胞質(zhì)溶膠中的IκBα隔離。TNFα，LPS和其他因子充當(dāng)激活誘導(dǎo)物，然后在IκBα的殘基32和36處磷酸化，導(dǎo)致IκBα通過遍在蛋白-蛋白酶體系統(tǒng)快速降解并隨后釋放RELA/p50復(fù)合物。用于被IκBα隔離的RELA核定位信號現(xiàn)在暴露，并且發(fā)生NF-κB的快速易位。同時，存在非經(jīng)典的NF-κB活化途徑，其涉及將p100蛋白水解切割成p52而不是p50。

此過程不需要RELA，因此這里不再詳細討論。由于TNFα刺激導(dǎo)致NF-κB核定位后，p50/RELA異二聚體將作為轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮作用，并與各種生物過程中涉及的各種基因結(jié)合，如白細胞活化/趨化性，TNFIKK的負調(diào)控。途徑，細胞代謝，抗原加工，僅舉幾例。RELA在不同殘基處的磷酸化也使其能夠與CDK和P-TEFb相互作用。

RELA中絲氨酸276的磷酸化允許其與含有CDK9和細胞周期蛋白T1亞基的P-TEFb相互作用，并且磷酸化ser276 RELA-P-TEFb復(fù)合物是IL-8和Gro-β活化所必需的。另一種機制涉及以RELA絲氨酸276磷酸化非依賴性方式激活預(yù)裝有Pol II的基因。通過小鼠中的同源重組基因敲除NF-κB基因顯示了這些組分在先天和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中的作用。由于肝細胞凋亡，RELA敲除小鼠是胚胎致死的。

也觀察到淋巴細胞激活失敗，表明RELA在免疫系統(tǒng)的正常發(fā)育中是必不可少的。相比之下，其他REL相關(guān)基因的缺失不會導(dǎo)致胚胎發(fā)育失敗，但也會注意到不同程度的缺陷。細胞因子如TNFα和IL-1可刺激RELA活化的事實也支持其參與免疫應(yīng)答。通常，RELA通過NF-κB活化參與適應(yīng)性免疫和對入侵病原體的反應(yīng)。沒有單獨的NF-κB蛋白的小鼠缺乏B細胞和T細胞活化和增殖，細胞因子產(chǎn)生和同種型轉(zhuǎn)換。RELA的突變也被發(fā)現(xiàn)是炎癥性腸病的原因。

研究應(yīng)用^[5]

NF-κB p65 Rabbit Polyclonal Antibody可用于研究急性心肌梗死模型大鼠TLR4/MyD88/NF-κB p65信號通路。研究方法取雄性SD大鼠48只,隨機分成6組:正常組,模型組,復(fù)方丹參滴丸組(0.0729 g·kg-1),復(fù)方龍脈寧低、中、高劑量組(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)。采用背部皮下多點注射鹽酸異丙腎上腺素的方法建立急性心肌梗死動物模型。

采用蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察大鼠心肌組織病理學(xué)變化;酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測大鼠血清中白細胞介素-1β（IL-1β）,白細胞介素-6（IL-6）,腫瘤壞死因子-α（TNF-α）,單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）,一氧化氮（NO）的含量;免疫組化法測定大鼠心肌組織中NF-κB激酶β抑制蛋白（IKKβ）,NF-κB抑制蛋白（IκBα）的表達水平;蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測大鼠心肌組織中TLR4,MyD88,NF-κB p65蛋白的表達。

結(jié)果:與正常組比較,模型組大鼠心肌損傷明顯,血清中IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1,NO含量顯著升高（P<0.05）,心肌組織中IκBα蛋白表達水平明顯降低（P<0.05）,心肌組織中IKKβ,TLR4,MyD88,NF-κB p65蛋白表達水平明顯升高（P<0.05）;與模型組比較,復(fù)方龍脈寧低、中、高劑量組能明顯改善大鼠心肌損傷,明顯升高IκBα蛋白的表達（P<0.05）,明顯降低血清中IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1,NO的活性及心肌組織中IKKβ,TLR4,MyD88,NF-κB p65蛋白的表達（P<0.05）。

結(jié)論:復(fù)方龍脈寧對心肌梗死的保護作用,可能與調(diào)控TLR4/MyD88/NF-κB p65信號通路相關(guān)因子的表達有關(guān)。

參考文獻

[1] Nolan GP, Ghosh S, Liou HC, Tempst P, Baltimore D (Mar 1991). "DNA binding and I kappa B inhibition of the cloned p65 subunit of NF-kappa B, a rel-related polypeptide". Cell. 64 (5): 961–9. doi:10.1016/0092-8674(91)90320-X. PMID 2001591.

[2] "RELA v-rel avian reticuloendotheliosis viral oncogene homolog A [Homo sapiens (human)]". Gene. National Center for Biotechnology Information (NCBI), U.S. National Library of Medicine.

[3] "Homo sapiens p65 gene for p65 subunit of transcription factor NF-kappa". Nucleotide. National Center for Biotechnology Information (NCBI), U.S. National Library of Medicine. 2006-11-14

[4]  Li Q, Verma IM (Oct 2002). "NF-kappaB regulation in the immune system". Nature Reviews. Immunology. 2 (10): 725–34. doi:10.1038/nri910. PMID 12360211

[5] 復(fù)方龍脈寧對急性心肌梗死模型大鼠TLR4/MyD88/NF-κB p65信號通路的影響[J]. 卜雕雕,蘇卓,柏?；?高佳雨,鄒俊波,張丹,王昌利.中國實驗方劑學(xué)雜志 .