背景^[1][2][3][4]

DAPT是γ-分泌酶(γ-secretase)抑制劑，抑制總Aβ和Aβ42的IC50分別為115和200 nM。

DAPT功能性抑制γ-分泌酶而降低HEK 293細(xì)胞中全部Aβ產(chǎn)量，IC50為20nM。DAPT作用于原代培養(yǎng)的人神經(jīng)細(xì)胞，也抑制Aβ產(chǎn)量，作用于全部Aβ和Aβ42時(shí)，IC50分別為115nM和200nM，比作用于HEK 293細(xì)胞時(shí)低5-10倍。最新研究顯示DAPT抑制SK-MES-1細(xì)胞增殖，這種作用存在濃度依賴性，IC50為11.265μM。

此外，DAPT作用于肺鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞，通過(guò)抑制Notch受體信號(hào)通路，也誘導(dǎo)依賴型和非依賴型細(xì)胞凋亡。DAPT抑制Aβ產(chǎn)生超過(guò)90％，僅影響培養(yǎng)基中APPβ的適度降低。盡管通過(guò)DAPT處理APPβ減少了約30％，但這種效應(yīng)不依賴于濃度，并且通過(guò)去除DAPT而逆轉(zhuǎn)。用遞增濃度的DAPT（0,25,50和75μM）處理CNE-2細(xì)胞，48小時(shí)后γ-分泌酶產(chǎn)生的Notch1片段Val1744-NICD以劑量依賴性方式降低（P<0.01）。）。在50μM濃度下，DAPT幾乎完全抑制了γ-分泌酶的激活。

DAPT按100mg/kg劑量處理PDAPP小鼠，產(chǎn)生強(qiáng)勁和持久的藥效，1小時(shí)內(nèi)腦中DAPT水平超過(guò)100ng/g，且處理后，持續(xù)上升達(dá)18小時(shí)，3小時(shí)后的時(shí)候觀察到最高水平為490ng/g。在此期間，DAPT按100mg/kg劑量處理，也降低大腦皮層全部Aβ和Aβ42，這種作用存在劑量依賴性，降低50%。DAPT按40mg/kg劑量作用于大鼠大腦皮層，抑制LPS誘導(dǎo)的γ分泌酶活性，且提高攜帶長(zhǎng)期神經(jīng)炎癥的細(xì)胞凋亡。

向PDAPP小鼠（100mg/kg sc）施用DAPT，并在腦皮質(zhì)中檢查DAPT和Aβ的水平。治療3小時(shí)后腦中達(dá)到490ng/g的峰值DAPT水平，并且在最初的18小時(shí)內(nèi)持續(xù)大于100ng/g（200nM）的水平。DAPT的這些腦濃度超過(guò)其IC 50，用于降低神經(jīng)元培養(yǎng)物中的Aβ（115 nM），并導(dǎo)致強(qiáng)大且持續(xù)的藥效學(xué)效應(yīng)[1]。DAPT通過(guò)下調(diào)大鼠Notch 1和核因子κB的表達(dá)來(lái)保護(hù)腦免受腦缺血。蛋白質(zhì)印跡分析還顯示DAPT（0.03 mg/kg）組中Notch 1和NF-κB表達(dá)顯著降低（與MCAO組相比，P<0.05）。

應(yīng)用研究^[5]

DAPT (γ-secretase抑制劑)可用于結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29增殖及乙醛脫氫酶1、Notch信號(hào)通路受體和配體表達(dá)的研究。研究方法體外培養(yǎng)HT-29細(xì)胞,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。分別以0、5、10、20、40、80μmol/L的DAPT作用于HT-29細(xì)胞24、48、72 h后,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力(以O(shè)D值表示)。分別以0、20、40μmol/L的DAPT作用于HT-29細(xì)胞24 h后,采用RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中的ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA,分別采用Western blotting法和免疫組化法檢測(cè)ALDH1、Notch4、DLL1蛋白。

分析HT-29細(xì)胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA及蛋白表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果DAPT對(duì)HT-29細(xì)胞的增殖抑制作用呈一定劑量、時(shí)間依賴性,40、80μmol/L濃度組培養(yǎng)48、72 h時(shí)細(xì)胞增殖能力低于培養(yǎng)24 h時(shí)(P均<0.05)。DAPT處理后的細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)典型凋亡狀態(tài)改變。20、40μmol/L的DAPT作用后HT-29細(xì)胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA相對(duì)表達(dá)量低于0μmol/L組(P均<0.05)。

0、20、40μmol/L的DAPT作用后HT-29細(xì)胞中ALDH1、Notch4、DLL1蛋白相對(duì)表達(dá)量依次降低(P均<0.05)。免疫組化染色圖像分析結(jié)果示,0、20、40μmol/L的DAPT作用后HT-29細(xì)胞中ALDH1、Notch4、DLL1蛋白表達(dá)OD值依次降低(P均<0.05)。HT-29細(xì)胞中ALDH1、DLL1 mRNA表達(dá)與Notch4 mRNA表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.997、0.998,P均<0.05)。

HT-29細(xì)胞中ALDH1、DLL1蛋白表達(dá)與Notch4蛋白表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.998、0.999,P均<0.05)。結(jié)論DAPT作用后,細(xì)胞增殖受到抑制,細(xì)胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào);DAPT對(duì)HT-29細(xì)胞的增殖抑制作用可能與降低腫瘤干細(xì)胞特性、下調(diào)Notch信號(hào)通路受體與配體表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。

參考文獻(xiàn)

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[5]. DAPT對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29增殖及乙醛脫氫酶1、Notch信號(hào)通路受體和配體表達(dá)的影響[J].趙小芳,王紅.山東醫(yī)藥.2017(15).