背景技術(shù)

四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系在反相液相色譜檢測(cè)中常用作水相流動(dòng)相，對(duì)一些結(jié)構(gòu)特殊、不易分離的化合物對(duì)常常能產(chǎn)生優(yōu)異的分離效果。

以鹽酸莫西沙星注射液為例，主要有關(guān)物質(zhì)包括：N-甲基雜質(zhì)、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E。中國(guó)藥典、歐洲藥典和美國(guó)藥典提供的有關(guān)物質(zhì)的分析方法為反相液相色譜，以苯基鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為乙腈-鹽溶液(取四丁基硫酸氫銨0.5g，磷酸二氫鉀1g，加水500mL，加磷酸2mL，用水稀釋至1000mL)(體積比30：70)，檢測(cè)波長(zhǎng)為293nm，流速為1.3mL/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣體積為20μL。該流動(dòng)相可有效分離莫西沙星及其雜質(zhì)。

但是，四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系隨著四丁基硫酸氫銨濃度的升高，穩(wěn)定性逐漸降低。以上述鹽酸莫西沙星的流動(dòng)相為例，A泵使用乙腈，B泵使用四丁基硫酸氫銨緩沖鹽溶液，該四丁基硫酸氫銨緩沖鹽溶液必須臨用現(xiàn)配，且使用時(shí)間不宜超過6小時(shí)(室溫放置8小時(shí)可見明顯的渾濁現(xiàn)象)，否則就會(huì)造成色譜峰漂移甚至出現(xiàn)鹽在泵或色譜柱中析出導(dǎo)致泵和色譜柱損壞的情況。這就帶來如下不便：

(1)一次不能配制太多緩沖鹽，一個(gè)工作日至少要配制2次，而配制流動(dòng)相是較為繁瑣的事情，尤其是這種緩沖鹽，需要用0.22μm濾膜過濾，每配制一次都需要清洗抽濾儀器，抽濾后還要再進(jìn)行清洗，耗費(fèi)時(shí)間和人力；

(2)不能在夜間不間斷分析；藥物分析領(lǐng)域的技術(shù)人員知道，為了項(xiàng)目進(jìn)度，液相色譜儀通常是24小時(shí)工作的，通常在下班前將需要分析的樣品和流動(dòng)相配制好，設(shè)置好儀器分析序列，自動(dòng)分析，這可以顯著提高工作效率；但是因?yàn)樗亩』蛩釟滗@緩沖鹽體系使用時(shí)間不宜超過6小時(shí)，所以無法在夜間持續(xù)運(yùn)行，儀器夜間利用率低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種性質(zhì)穩(wěn)定、有效期長(zhǎng)的液相色譜檢測(cè)用四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系。

本發(fā)明通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：

一種液相色譜檢測(cè)用四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系，溶劑為水，溶質(zhì)包括四丁基硫酸氫銨和緩沖離子對(duì)，該緩沖離子對(duì)由磷酸二氫鉀和磷酸組成，溶質(zhì)還包括絡(luò)合劑，該絡(luò)合劑優(yōu)選乙二胺四乙酸二鉀。

優(yōu)選地，1L緩沖鹽體系中含有四丁基硫酸氫銨0.4-0.6g、磷酸二氫鉀0.9-1.1g、含量為85％的磷酸1.9-2.1mL、乙二胺四乙酸二鉀40-60mg。

優(yōu)選地，1L緩沖鹽體系中含有四丁基硫酸氫銨0.5g、磷酸二氫鉀1g、含量為85％的磷酸2mL、乙二胺四乙酸二鉀50mg。

上述四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系的制備方法：先用適量水將四丁基硫酸氫銨、磷酸二氫鉀、磷酸和乙二胺四乙酸二鉀溶解，再稀釋定容。

上述四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系在反相液相色譜中作為流動(dòng)相的用途。

優(yōu)選地，上述四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系用作反相液相色譜的水相流動(dòng)相，用于鹽酸莫西沙星原料及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的分析檢測(cè)。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提供的四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，不會(huì)出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象；以鹽酸莫西沙星有關(guān)物質(zhì)分析為例，可見室溫放置24小時(shí)的四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系與新配置的四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系對(duì)莫西沙星、N-甲基雜質(zhì)、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E在反相色譜柱上的色譜行為基本一致。

附圖說明

圖1為分別以室溫放置24小時(shí)的四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系、新配置的四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系作為流動(dòng)相水相的HPLC色譜圖；其中，A為室溫放置24小時(shí)的本發(fā)明四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系，B為新配置的本發(fā)明四丁基硫酸氫銨緩沖鹽體系。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步介紹本發(fā)明的技術(shù)方案。

流動(dòng)相的配制及穩(wěn)定性觀察

1、試劑來源：

水，色譜用水，自制；

四丁基硫酸氫銨，分析純，上海君瑞生物技術(shù)有限公司；

磷酸二氫鉀，分析純，上海君瑞生物技術(shù)有限公司；

磷酸，含量85％，分析純，南京賽泓瑞生物科技有限公司；

乙二胺四乙酸二鉀，分析純，北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司。

2、配制方法

本發(fā)明緩沖體系：稱取四丁基硫酸氫銨0.5g、磷酸二氫鉀1g、含量為85％的磷酸2mL、乙二胺四乙酸二鉀50mg用500mL水溶解，再加水稀釋定容至1L。

對(duì)比緩沖體系：按常規(guī)方法，稱取四丁基硫酸氫銨0.5g、磷酸二氫鉀1g、含量為85％的磷酸2mL用500mL水溶解，再加水稀釋定容至1L。

3、穩(wěn)定性觀察

分別將上述配制的本發(fā)明緩沖體系、對(duì)比緩沖體系裝在具塞玻璃瓶中置于室溫(25±2℃)條件下，每隔2h肉眼觀察是否有變化。結(jié)果在8h時(shí)，對(duì)比緩沖體系可見渾濁現(xiàn)象，玻璃瓶看上去如同蒙上一層霧；在10h時(shí)，對(duì)比緩沖體系渾濁現(xiàn)象加劇，溶液中可見短纖維狀懸浮物；本發(fā)明緩沖體系在觀察的24h內(nèi)未見渾濁現(xiàn)象。