背景^[1-3]

人血清(混合血型)是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學(xué)成分組成,這些化學(xué)成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。

人血清（混合血型）經(jīng)無菌采集、分離、微孔過濾后而成，性狀為澄清液體，無噬菌體、低內(nèi)毒素，無溶血無異物無細(xì)菌真菌支原體霉形體衣原體等，適用于試驗室或生化科研相關(guān)試驗，滿足不同科研實驗的多種需求。

人血清(混合血型)

保存方法：血清應(yīng)保存在-5℃至-2℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議將無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

避免沉淀

1、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

2、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生

3、請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。

4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

5、若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

應(yīng)用^[4][5]

用于高靈敏人血清HER2蛋白檢測方法的建立及臨床應(yīng)用研究

使用血清中HER2水平的變化趨勢用作評價腫瘤的治療效果以及作為腫瘤患者預(yù)后的評估指標(biāo),但是由于目前國內(nèi)靈敏度較高的血清HER2的檢測方法的技術(shù)尚缺,因此本實驗一項人血清中HER2蛋白含量高靈敏檢測技術(shù),并進(jìn)行臨床標(biāo)本檢測,為腫瘤治療及預(yù)后評估提供參考。

材料與方法：實驗室從以下幾方面來建立人血清HER2檢測方法:（1）抗HER2的單克隆抗體HuA21與HerA以及高純度的標(biāo)準(zhǔn)抗原HER2-ECD的制備:以適應(yīng)的濃度接種培養(yǎng)本實驗室保存的CHO細(xì)胞,待細(xì)胞培養(yǎng)至90%密度時分別轉(zhuǎn)染含HuA21、HerA、HER2-ECD基因的表達(dá)載體,待24小時的繼續(xù)培養(yǎng)后用胰酶進(jìn)行消化并將其傳代培養(yǎng),并往培養(yǎng)基內(nèi)加入0.3mg/ml Zeocin混合成選擇性培養(yǎng)基用來篩選抗性克隆。將得到的高表達(dá)抗性克隆逐級擴(kuò)大培養(yǎng),收取培養(yǎng)的上清液,進(jìn)一步純化、濃縮,采用SDS-PAGE非還原電泳技術(shù)純化抗體HuA21、HerA,采用BCA法蛋白定量試劑盒測定HER2-ECD標(biāo)準(zhǔn)抗原的含量,并與美國批準(zhǔn)臨床使用的血清HER-2/neu ELISA測定試劑盒檢測結(jié)果進(jìn)行比對。

（2）運用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）技術(shù),分別以抗HER2單克隆抗體HuA21為包被抗體,生物素標(biāo)記的HerA作為檢測抗體,將得到的抗原標(biāo)準(zhǔn)品HER2-ECD構(gòu)建檢測血清中HER2蛋白含量技術(shù),并以此作為配對抗體親和力、特異性、穩(wěn)定性的檢測以及配對抗體濃度、反應(yīng)所需試劑和反應(yīng)條件的優(yōu)化等；

（3）收集合肥地區(qū)的乳腺癌患者的血清標(biāo)本,使用研制的試劑盒進(jìn)行檢測,并與西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品有限公司的類似試劑盒對比實驗進(jìn)行檢測,運用student’s t檢驗等統(tǒng)計方法對實驗結(jié)果進(jìn)行分析總結(jié)。

結(jié)果：純度較高的抗HER2單克隆抗體HuA21和HerA由本實驗制備成功。對實驗設(shè)計使用的試劑盒各項組分進(jìn)行優(yōu)化,從而確定了高靈敏人血清HER2檢測試劑盒的包被抗體和檢測抗體抗分別為HuA21和生物素標(biāo)記的HerA。由上述方法所建立的ELISA方法檢測靈敏度為7.8 pg/ml,檢測范圍為0-500 pg/ml,其批內(nèi)變異系數(shù)為0.2%~10.9%,批間變異系數(shù)為1.4%~12.4%,在人血清中的抗原回收率在86.84%~116.40%之間,與上海西門子公司的化學(xué)發(fā)光法試劑盒測定臨床血清HER2含量相比較,實驗結(jié)果表明二者之間的差異無明顯的統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）,且其兩者之間的相關(guān)性（R2＞0.70）具有明顯的一致性。

參考文獻(xiàn)

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[3]Management of patients with HER2‐positive metastatic breast cancer:Is there an optimal sequence of HER2‐directed approaches?[J].Amelia B.Zelnak,Kari B.Wisinski.Cancer.2015(1)

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[5]龔歡秀.高靈敏人血清HER2蛋白檢測方法的建立及臨床應(yīng)用[D].安徽醫(yī)科大學(xué),2017.