背景[1-3]
綿羊抗TSH血清是以TSH為抗原對綿羊進(jìn)行注射免疫再收集免疫合格的綿羊血制備成的抗TSH血清，只要用于TSH的血清檢測實驗。
促甲狀腺激素（TSH）是由腺垂體分泌的激素，腺垂體分泌促甲狀腺激素，一方面受下丘腦分泌的促甲狀腺激素釋放激素（TRH）的促進(jìn)性影響，另一方面又受到甲狀腺激素反饋性的抑制性影響，二者互相拮抗，它們組成下丘腦-腺垂體-甲狀腺軸。
綿羊抗TSH血清
TSH是垂體前葉分泌的激素之一，其主要功能是控制、調(diào)節(jié)甲狀腺的活動。測定血清（漿）中的促甲狀腺激素是診斷和治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥和甲狀腺功能減低癥以及研究下丘腦-垂體-甲狀腺軸的重要指標(biāo)之一。在診斷甲狀腺功能低下和鑒別診斷原發(fā)性和繼發(fā)（下丘腦性或垂體性）甲狀腺功能低下等方面是不可缺少的工具。甲狀腺功能亢進(jìn)癥和甲狀腺功能減低癥治療時，其TSH可作為療效的判斷指標(biāo)。此外還可用于觀察垂體TSH的儲備功能，并可進(jìn)一步區(qū)別下丘腦和垂體的病變。TSH檢測是查明甲狀腺功能的初篩試驗。游離甲狀腺濃度的微小變化就會帶來TSH濃度向反方向的顯著調(diào)整。
1.血清TSH升高：常見于原發(fā)性甲狀腺功能減退癥、TSH分泌瘤、缺碘性地方性甲狀腺腫、甲狀腺激素抵抗綜合征等。
2.血清TSH降低：常見于原發(fā)性甲狀腺功能亢進(jìn)癥，TSH基因突變，各種垂體性疾?。ㄈ绱贵w腺瘤、垂體炎癥、垂體出血性疾病或損傷性疾病等）影響TSH細(xì)胞功能，各種甲狀腺炎的損傷期，以及臨床應(yīng)用大劑量糖皮質(zhì)激素等
應(yīng)用[4][5]
用于TSH通過上調(diào)BKCa通道亞基表達(dá)促進(jìn)主動脈平滑肌增殖的初步研究
探討:1.甲狀腺功能減退是否能在短期內(nèi)造成大鼠胸主動脈發(fā)生動脈粥樣硬化早期改變；2.TSH是否可以促進(jìn)VSMCs異常增殖3.TSH是否通過影響VSMCs細(xì)胞中的BKCa通道而起作用；4.對可能起作用的信號通路的初步探究。
方法:體內(nèi)實驗:采用Wistar大鼠建立甲狀腺功能減退模型,通過記錄手術(shù)、HE染色觀察切取組織形態(tài)學(xué)、ELISA法和比色法檢測血液指標(biāo)驗證模型,待術(shù)后16周時取大鼠胸主動脈,行HE染色觀察動脈壁形態(tài)變化,行Western Blot、組織免疫熒光及組織免疫組化染色觀察相應(yīng)蛋白表達(dá)情況,行組織油紅O染色觀察動脈壁脂質(zhì)沉積情況,RT-q PCR法檢測相關(guān)m RNA表達(dá)情況。
體外實驗:選用人主動脈平滑肌細(xì)胞（Human Aortic Smooth Muscle Cells,HASMCs）,對照組為正常培養(yǎng)細(xì)胞（即TSH濃度為0ng/ml）,實驗組1、實驗組2及實驗組3在對照組基礎(chǔ)上,分別以1ng/ml、5ng/ml及10ng/ml的TSH為刺激條件,實驗組4在對照組基礎(chǔ)上,以5ng/ml TSH+100nmol/L IBTX為刺激條件,4個實驗組刺激時間均為24h,通過CCK8、RT-q PCR、Western Blot及ELISA檢測明確TSH、BKCa通道和VSMCs之間關(guān)系,并檢測了c AMP在TSH刺激后的變化情況。結(jié)果:1.建立甲狀腺功能減退大鼠模型:術(shù)區(qū)及術(shù)后組織可見Wistar大鼠甲狀腺組織完全切除,HE染色明確大鼠頸部剝離組織為甲狀腺組織,且術(shù)后28天甲減組大鼠氣管周圍未查見甲狀腺組織特征性濾泡。術(shù)后第28天甲減組大鼠血清TT3、TT4水平較假手術(shù)組明顯降低（P＜0.001）,而甲減組大鼠血清TSH水平較假手術(shù)組明顯升高（P＜0.001）,兩組大鼠血清中Ca2+水平無明顯差異。
2. 甲狀腺功能減退引起大鼠胸主動脈發(fā)生AS早期改變:術(shù)后16周,選取兩組大鼠胸主動脈行油紅O染色和HE染色后發(fā)現(xiàn),較假手術(shù)組大鼠,甲減組大鼠血管有脂質(zhì)沉積（P＜0.01）,且平滑肌層增厚、細(xì)胞排列紊亂。
3. TSH促進(jìn)主動脈平滑肌細(xì)胞增殖:術(shù)后16周,選取胸主動脈行免疫熒光發(fā)現(xiàn),較假手術(shù)組大鼠,甲減組大鼠血管中膜層平滑肌細(xì)胞α-SMA蛋白表達(dá)減少（P＜0.001）,而OPN蛋白表達(dá)量增加（P＜0.001）。將兩組大鼠胸主動脈組織行Wstern Blot發(fā)現(xiàn),較假手術(shù)組大鼠,甲減組大鼠胸主動脈cyclin A、cyclin D1及增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）蛋白表達(dá)上升（P＜0.05）。在體外實驗中,對HASMCs給予TSH刺激后,CCK8結(jié)果提示,TSH可刺激HASMCs增殖,且在5ng/ml時增殖率上升最明顯,而當(dāng)TSH濃度升至10g/ml時,增值率反而下降,但仍高于對照組。Western Blot結(jié)果提示,TSH可促進(jìn)HASMCs的cyclin A、cyclin D1及PCNA增殖相關(guān)蛋白表達(dá)上升,且在TSH濃度為5ng/ml時最為明顯,而當(dāng)TSH濃度上升至10ng/ml時,三個蛋白的表達(dá)較實驗組2卻降低（P＜0.05）。
4.甲狀腺功能減退大鼠引起胸主動脈早期AS改變機制初探:術(shù)后16周,較假手術(shù)組大鼠,甲減組大鼠血管中膜層平滑肌細(xì)胞BKCa通道α及β1亞基表達(dá)量升高（P＜0.01）。體外實驗中,當(dāng)TSH濃度為5ng/ml時,相較對照組,BKCa通道α和β1亞基表達(dá)量明顯上升（P＜0.05）。ELISA結(jié)果提示,TSH濃度為5ng/ml刺激HASMCs時,細(xì)胞內(nèi)的c AMP濃度明顯上升（P＜0.01）。最后,當(dāng)加入BKCa通道特異性阻滯劑IBTX后,與實驗組2相比,實驗組4的cyclin A、cyclin D1及PCNA增殖相關(guān)蛋白表達(dá)量明顯降低（P＜0.05）。
參考文獻(xiàn)
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