背景[1-3]
優(yōu)級(jí)胎牛血清(無(wú)噬菌體低內(nèi)毒素)采自引產(chǎn)胎牛，經(jīng)3次100nm過(guò)濾，無(wú)噬菌體，內(nèi)毒素含量極低≤5EU/ml，極佳的促細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖效果。優(yōu)級(jí)胎牛血清適合于細(xì)胞株的保藏及組織器官培養(yǎng)、單抗研制、絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞。
內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的特有成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時(shí)，才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡，血清中內(nèi)毒素含量越低，對(duì)細(xì)胞毒性越小，越利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代；內(nèi)毒素含量過(guò)高，會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。國(guó)際上規(guī)定，胎牛血清的級(jí)別，應(yīng)以內(nèi)毒素水平的高低來(lái)確定，其中，特級(jí)胎牛血清的內(nèi)毒素應(yīng)<10EU/ml。
優(yōu)級(jí)胎牛血清(無(wú)噬菌體低內(nèi)毒素)
產(chǎn)品特點(diǎn)
pH值（25℃）：7.0~8.5
總蛋白含量（g/L）：35~45
血紅蛋白含量（g/L）：≤200
細(xì)菌內(nèi)毒素含量（EU/mL）：≤5
滲透壓摩爾濃度（mOsmol/Kg）：250~330
牛腹瀉、牛腺、牛細(xì)小、呼腸孤、牛副流感、狂犬病毒檢測(cè)結(jié)果均為陰性
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。
應(yīng)用[4][5]
用于外周血EPCs的體外培養(yǎng)及aspirin對(duì)EPCs遷移功能影響的研究
通過(guò)研究,探索改進(jìn)人外周血中EPCs分離和體外培養(yǎng)的方法,探明人外周血中EPCs體外培養(yǎng)的生長(zhǎng)特征,找尋細(xì)胞干預(yù)時(shí)期,為人外周血EPCs的研究奠定基礎(chǔ)。同時(shí),利用Transwell培養(yǎng)皿模擬體外EPCs的遷移過(guò)程,觀察阿司匹林對(duì)EPCs的體外遷移功能的影響,旨在為臨床缺血性血管疾病治療中阿司匹林的合理應(yīng)用提供參考。
方法:人類(lèi)外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定:無(wú)菌條件下采集健康捐獻(xiàn)者外周靜脈血20ml,運(yùn)用Ficoll密度梯度離心法,將常規(guī)的2000rpm調(diào)整至1200rpm,分離外周血中單個(gè)核細(xì)胞（MNCs）,經(jīng)過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù),臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力后,用含有10%優(yōu)級(jí)胎牛血清的人類(lèi)內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)基按常規(guī)進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)培養(yǎng)所得的細(xì)胞每日在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)學(xué)變化,觀測(cè)評(píng)價(jià)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程。并進(jìn)行EPCs特征和功能的鑒定:1、VEGFR-2、CD133、vWF的免疫熒光檢測(cè);2、細(xì)胞攝取acLDL和結(jié)合UEA-1實(shí)驗(yàn)。
阿司匹林對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移功能的影響:在部分研究的基礎(chǔ)上,選擇培養(yǎng)7天的細(xì)胞進(jìn)行這一步研究。將培養(yǎng)7天的細(xì)胞消化,重懸,計(jì)數(shù)后將懸液放入Transwell培養(yǎng)皿的上室。將含有不同濃度阿司匹林的含血清培養(yǎng)液加入到Transwell培養(yǎng)皿的下室,將Transwell培養(yǎng)皿放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)遷移到低層的細(xì)胞,以觀察評(píng)價(jià)細(xì)胞遷移能力。通過(guò)與無(wú)阿司匹林的含血清培養(yǎng)液組比較,觀測(cè)不同濃度作用相同時(shí)間或同一濃度作用不同時(shí)間,阿司匹林對(duì)人外周血中EPCs遷移功能的影響。
結(jié)果:將離心速度調(diào)整至1200rpm后,每ml外周血經(jīng)Ficoll密度梯度離心法分離可得到MNCs 1×10~6～2×10~6個(gè),臺(tái)盼藍(lán)染色后活細(xì)胞百分率在95±3%。培養(yǎng)后早期細(xì)胞大多為圓形或橢圓形,混有少量紡錘形細(xì)胞,第5天起,部分圓形大單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為梭形貼壁內(nèi)皮祖細(xì)胞;7天左右出現(xiàn)由數(shù)十個(gè)細(xì)胞形成的細(xì)胞集落,并可見(jiàn)到細(xì)胞呈條索狀排列;10天左右,細(xì)胞變?yōu)殚L(zhǎng)梭形,相互交聯(lián);14天后細(xì)胞開(kāi)始衰老、崩解,數(shù)量減少。在培養(yǎng)的第7天,細(xì)胞生長(zhǎng)性狀,通過(guò)檢測(cè),細(xì)胞的內(nèi)皮祖細(xì)胞系特異性標(biāo)志因子VEGFR-2、CD133與vWF表達(dá)良好,攝取acLDL和結(jié)合UEA-1實(shí)驗(yàn)均呈強(qiáng)陽(yáng)性。
選取培養(yǎng)第7天的細(xì)胞,采用Transwell培養(yǎng)皿檢測(cè)阿司匹林對(duì)EPCs遷移能力的影響,在200倍顯微鏡下計(jì)數(shù)Transwell膜底面的遷移細(xì)胞。無(wú)阿司匹林對(duì)照組26.8±1.73,加入1mmol/L阿司匹林組24.3±1.94,加入2mmol/L阿司匹林組20.1±2.57,加入5mmol/L阿司匹林組13.1±1.87,加入10mmol/L阿司匹林組9.2±1.58。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析證實(shí),加入阿司匹林組Transwell膜底面細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組顯著減少,隨著加入阿司匹林的濃度增加,Transwell膜底面細(xì)胞數(shù)的減少幅度更為明顯。
參考文獻(xiàn)
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