背景^[1-3]

R2A液體培養(yǎng)基用于飲用水中細菌的培養(yǎng)，成分(g/L)：胰蛋白胨：0.25；酸水解酪蛋白；0.5；酵母浸粉：0.5；可溶性淀粉：0.5；磷酸氫二鉀：0.3；硫酸鎂：0.1；丙酮酸鈉：0.3；蛋白胨：0.25；葡萄糖：0.5；pH值7.2±0.2 25℃。

用法：稱取本品3.2g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。

R2A液體培養(yǎng)基

純化水采用的R2A培養(yǎng)基原理如下：

1、R2A培養(yǎng)基可以修復(fù)被氯氣損傷的細菌，支持耐受氯氣的微生物的生長。

2、R2A培養(yǎng)基中的酵母浸出粉、蛋白胨、酸蛋白水解物提供氮源、維生素、生長因子;葡萄糖、為可發(fā)酵糖類;可溶性淀粉可以吸收菌在復(fù)蘇過程產(chǎn)生的有害物質(zhì);

3、R2A培養(yǎng)基中的丙酮酸鈉可增強細菌的復(fù)蘇。

4、R2A培養(yǎng)基中的磷酸二氫鉀為酸堿緩沖劑，無水硫酸鎂提供二價陽離子，瓊脂為凝固劑。

培養(yǎng)基為適合生物生長所需要的人工配制的混合物質(zhì)養(yǎng)料，常指培養(yǎng)微生物或生物細胞組織的養(yǎng)料，主要用于微生物的分離、培養(yǎng)、鑒定、保藏和釀造、發(fā)酵等方面。具體成分根據(jù)生物營養(yǎng)需要而不同。

一般含有水、碳水化合物、含氨物質(zhì)和礦質(zhì)鹽類等。按所用原料不同可分為兩類：應(yīng)用化學(xué)藥品配成并標明成分的，稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基，應(yīng)用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配成，稱為天然培養(yǎng)基。又因加入或不加入賦形劑可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。R2A可用作純化水的微生物限度檢查。

應(yīng)用^[4][5]

用于大姜根際及內(nèi)生益生菌的分離篩選與應(yīng)用研究

姜瘟病是由茄科雷爾氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的細菌性土傳維管束病害,因其侵染機制復(fù)雜、傳播快等特點,姜瘟病的防治仍很難解決。目前,生物防治是該病防治的研究熱點,因此通過益生菌開展生物防治意義重大。

研究以山東萊蕪大姜及其根際土壤為材料,對其新鮮塊莖和根際土壤的微生物進行分離,通過生防效果評價從中發(fā)掘具有應(yīng)用潛力的菌種資源,進一步開展了大姜根際微生物BJW-1的包埋固定化及定殖能力研究,并初步探討了增強型綠色熒光蛋白（Enhanced green fluorescent protein,EGFP）對內(nèi)生菌BJ-1的標記,其主要結(jié)果如下:本文通過對山東萊蕪大姜新鮮塊莖及其根際土壤中微生物的分離,共獲得113株,其中根際菌66株,內(nèi)生菌47株。

采用優(yōu)化的表面消毒方法分離生姜塊莖內(nèi)生菌,結(jié)果顯示:生姜塊莖中內(nèi)生菌平均數(shù)量為2.86×10~3 cfu/g.fw,以細菌種類最多,放線菌次之、真菌最少。R2A培養(yǎng)基是分離生姜內(nèi)生菌的培養(yǎng)基,采用R2A培養(yǎng)基、KB培養(yǎng)基、TSA培養(yǎng)基分離生姜內(nèi)生菌,可達到較好的效果。

探討了部分菌株對病原真菌的生防潛能,結(jié)果表明:11株放線菌,8株芽孢菌有較好的拮抗活性,其中菌株SJW-1、BJW-5、BJ-7對Fusarium spp.36194、Fusarium oxysporum都有抑菌作用,可能是鐮孢屬（Fusarium）病原菌植物病害的良好生防菌。芽孢桿菌是姜瘟病防治的重要生防資源,通過抑菌圈和盆栽實驗方法,從根際土、塊莖中篩選到兩株防病效果良好的菌株:根際菌BJW-1、內(nèi)生菌BJ-1,其防病效果分別為66.45%、61.02%。通過形態(tài)學(xué)、生理生化特性分析及分子生物學(xué)鑒定,可以判定根際拮抗菌BJW-1為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）,內(nèi)生菌BJ-1為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。

進一步利用微生物包埋固定化技術(shù)包埋根際解淀粉芽孢桿菌BJW-1,以提高其在土壤中的定殖能力,為微生物菌劑的開發(fā)提供基礎(chǔ)。首先通過包埋存活率與液體培養(yǎng)基增殖能力實驗,確定了包埋基料的配比及濃度:海藻酸鈉溶液:菌液=1:1,氯化鈣3.0%。在液體培養(yǎng)基環(huán)境中,包埋顆粒BJW-1的活菌數(shù)呈現(xiàn)一種“先增后減”的趨勢,檢測8天后,包埋顆粒BJW-1的菌活較對照組提高了53.26%。其次,通過復(fù)合生物多糖包埋顆粒BJW-1在室內(nèi)土壤中的定殖能力分析,初步確定了優(yōu)選復(fù)合配方:海藻酸鈉溶液:菌液=1:1,氯化鈣3%,多孔淀粉1.5%,糖蜜2%,檢測跟蹤30天,其存活率變化穩(wěn)定,平均存活率為160%,30天后,BJW-1的存活率為122%,與對照組相比,提高了8.13倍。

最后,通過大田土壤定殖實驗,肯定了優(yōu)選復(fù)合配方包埋BJW-1菌劑的定殖能力,與同菌種普通菌劑相比,田間定殖能力有顯著提升,最高可提升12.4倍。最后,以內(nèi)生枯草芽孢桿菌BJ-1為出發(fā)菌株,用EGFP標記該菌株,以期研究其在大姜植株內(nèi)的定殖規(guī)律,進一步揭示生物防治機制。

參考文獻

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