背景[1][2]
單克隆抗體技術起源于Kohler等創(chuàng)建的體外鼠源雜交瘤技術。經多年研究,鼠單抗已從單純的生物實驗室科研及臨床診斷發(fā)展到治療性抗體藥物。但鼠單抗的主要缺陷是小鼠免疫系統(tǒng)不能識別某些免疫原,尤其是鼠源性的免疫原,而且鼠單抗的親和性不如兔來源抗體的親和性高。然而由于沒有發(fā)現兔源性的漿細胞瘤及病毒體外轉染兔B細胞的技術困難,直到1995年在c-myc/v-abl轉基因兔身上成功地獲得了兔漿細胞瘤細胞系,得到了穩(wěn)定的兔-兔雜交瘤,才使兔單克隆抗體技術有了突破性進展。
近年兔單克隆抗體技術日臻完善,目前商品化的兔單抗已達數千種。α平滑肌肌動蛋白是平滑肌的主要標志物,其含量對平滑肌的收縮能力具有較大影響,可反映平滑肌數量及其收縮能力的改變。α平滑肌肌動蛋白在腫瘤新生血管的生成過程中起重要作用,其機制是通過調節(jié)相關細胞的增殖活性以及諸如血小板生成素等促血管生成因子的表達來直接或間接地促進腫瘤血管的生成。
研究觀察正常乳腺組織間質中,α平滑肌肌動蛋白表達很弱,基本上不表達;在原位癌組織間質中, 平滑肌肌動蛋白表達相對增強;在進入浸潤階段后,腫瘤間質內存在著大量表達 平滑肌肌動蛋白的肌纖維母細胞成分。隨著浸潤性增加,臨床分期的進展,淋巴結轉移的出現,間質僅平滑肌肌動蛋白表達增強,反映了乳腺從正常組織向原位癌、原位癌向浸潤癌發(fā)展的過程。
α-平滑肌肌動蛋白兔單克隆抗體(HRP結合物)識別總α平滑肌肌蛋白的內源水平?;钚晕锓N包括人,老鼠,大鼠。α平滑肌肌動蛋白兔單克隆抗體是通過用對應于人α-平滑肌肌動蛋白的氨基末端殘基的合成肽免疫動物而產生的。
α-平滑肌肌動蛋白兔單克隆抗體于-20℃保存,Western-抗稀釋液-20℃或4℃保存,一年有效。Western-抗稀釋液優(yōu)先推薦4℃保存,長期不使用可以考慮-20℃保存,但凍融可能會導致出現輕微的渾濁和少量不溶物。 如果α-平滑肌肌動蛋白兔單克隆抗體用于Western blot (WB)、免疫熒光(IF)、免疫細胞化學(ICC)等實驗,請注意回收使用過的稀釋抗體?;厥盏目贵w通常至少可以重復使用5-10次。稀釋后的抗體,包括已經使用過的稀釋抗體,請4℃保存。
回收后重復使用的α-平滑肌肌動蛋白兔單克隆抗體,使用方法同新鮮稀釋的抗體。如果在重復使用過程中發(fā)現抗體出現輕微混濁現象,可以10,000g離心1-3分鐘,取上清用于后續(xù)檢測。如果回收的抗體出現明顯的絮狀物或長霉長菌等情況,則可以考慮廢棄該抗體。 提供的Western一抗稀釋液也可以用于免疫熒光(IF)、免疫組化(IHC)、免疫細胞化學(ICC)等適當用途。如果希望獲得的檢測效果,請考慮使用上述檢測專用的一抗稀釋液。
主要參考資料
[1] 李秀清, 路蘭紅. α 平滑肌肌動蛋白, 波形蛋白與陷窩蛋白 1 在乳腺癌組織中的表達及臨床意義[J]. 醫(yī)學綜述, 2014, 20(22): 4174-4175.
[2] 朱艷芬, 宋澤慶. 哮喘小鼠氣道重塑中 α 平滑肌肌動蛋白的表達[J]. 中國免疫學雜志, 2011, 27(10): 934-937.