介紹^[1]

核酸擴(kuò)增方法應(yīng)用于分子生物學(xué)和重組DNA技術(shù)領(lǐng)域。這些方法用于增加特異核酸序列的拷貝數(shù)，這些特異核酸序列少量存在并常常存在于同時(shí)也存在有多種其他核酸序列(包括RNA和DNA)的環(huán)境中。使用核酸擴(kuò)增方法尤其有助于核酸的檢測(cè)和定量，其對(duì)于診斷例如傳染病、遺傳病和各種類型的癌癥是重要的。核酸擴(kuò)增方法也應(yīng)用于其他領(lǐng)域，在這些領(lǐng)域中研究其中可能微量存在核酸的樣品，例如法醫(yī)學(xué)、考古學(xué)或者確定親權(quán)。等溫連續(xù)方法。

采用這些方法需要四種酶活性來完成擴(kuò)增：依賴RNA的DNA聚合酶活性、依賴DNA地DNA聚合酶活性、RNA酶(H)活性和RNA 聚合酶活性。這些活性中的一些可以聯(lián)合在一種酶中，所以通常只有 2或3種酶是必需的。依賴DNA的RNA聚合酶從含有可被RNA聚合酶識(shí)別的啟動(dòng)子 的DNA模板合成多重RNA拷貝。額外的核酸序列可以存在于目標(biāo)序列的3′和5′末端。

可以通過將下列物質(zhì)放在一起來開始擴(kuò)增反應(yīng)：來自起始材料的該核酸；適當(dāng)?shù)拿?，這些酶一起提供上述的活性；和至少一種(但通常為兩種)寡核苷酸。這些寡核苷酸中至少一種應(yīng)當(dāng)含有RNA聚合酶啟動(dòng)子的序列。雖然單鏈或雙鏈DNA同樣 可用作輸入材料，但是如果輸入材料為單鏈RNA，則基于轉(zhuǎn)錄的擴(kuò)增方法就特別有用。

經(jīng)過優(yōu)化后的末端加A酶(A-Tailing Enzyme)可以有效地將dAMP摻入平末端DNA片段的3′端。3′-dA DNA產(chǎn)物在隨后的連接步驟中可防止相互形成多聚體。用末端加A酶(A-Tailing Enzyme)模塊加A尾的DNA可以連接到具有互補(bǔ)dT突出端的連接子或克隆載體上。末端加A酶可以將加A尾的DNA連接到具有互補(bǔ)dT突出端的連接子或克隆載體上。

主要參考資料

[1] CN02807706.7 用基于轉(zhuǎn)錄的擴(kuò)增來擴(kuò)增和檢測(cè)DNA的方法