背景及概述
克菌丹化學(xué)名：N-(三氯甲硫基)-環(huán)己-4-烯-1,2-二甲酰亞胺，化學(xué)式為C9H8O2NSCl3，為白色晶體，是一種常用的農(nóng)業(yè)殺菌劑，可用于防治Botrytis、Fusarium、Fusicoccum、Pythium?？稍鰪?qiáng)反硝化作用和總培養(yǎng)菌?？司儆谌燃琢蚧悮⒕鷦潜蕉柞啺返难苌??？司ぶ饕米鳉⒕鷦?，它們對(duì)多種果樹、蔬菜病害的滅殺效果好，且藥害小，適當(dāng)使用還有刺激植物生長(zhǎng)的作用。盡管克菌丹對(duì)哺乳動(dòng)物毒性低，但反芻動(dòng)物尤其綿羊?qū)λ貏e敏感，致死量極低，同時(shí)克菌丹是對(duì)人具有可疑致癌的農(nóng)藥。
制備
由丁二烯與順丁烯二酸酐反應(yīng)生成1,2,3,4-四氫苯二甲酸酐，再與氨作用合成1,2,3,4-四氫苯二甲酰亞胺，最后與三氯硫氯甲烷反應(yīng)得克菌丹，即N-(三氯甲硫基)-環(huán)己-4-烯-1,2-二甲酰亞胺。
1,2,3,4-四氫化鄰苯二甲酰亞胺的制備
1,2,3,4-四氫化鄰苯二甲酸酐的制備將順丁烯二酸酐和苯混合加熱，使酸酐溶解，待溫度升至70℃時(shí)，通入丁二烯，在(75±2)℃反應(yīng)，直至通氣反應(yīng)至終點(diǎn)，然后趁熱把物料放入結(jié)晶槽，冷卻至室溫，過濾，濾餅于50～70℃干燥，得1,2,3,4-四氫化鄰苯二甲酸酐，含量95%以上。 2.1,2,3,4-四氫化鄰苯二甲酰亞胺的制備將氨水加入反應(yīng)瓶中，于50℃以下加入1,2,3,4-四氫化鄰苯二甲酸酐,逐漸升溫至105～110℃，使剩余的游離氨及水蒸發(fā)，再逐漸升溫至230～250℃，約4.5～5h，將物料放出，冷卻至80℃，加熱水溶解，冷卻結(jié)晶，過濾，干燥，得1,2,3,4-四氫化鄰苯二甲酰亞胺[1]。
N-(三氯甲硫基)-環(huán)己-4-烯-1,2-二甲酰亞胺的制備
將1,2,3,4-四氫化鄰苯二甲酰亞胺加入到預(yù)冷至0℃的5%～6%的氫氧化鈉溶液中，待完全溶解后，加入三氯硫氯甲烷，在0～5℃反應(yīng)。當(dāng)pH值為8以下時(shí)，視反應(yīng)結(jié)束，過濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得N-(三氯甲硫基)-環(huán)己-4-烯-1,2-二甲酰亞胺。
固相萃取氣相色譜法測(cè)定克菌丹含量
采用硅鎂吸附劑和硅膠作為混合固相萃取的凈化方法，建立了固相萃取氣相色譜法同時(shí)測(cè)定水果中克菌丹的分析方法。研究了多種固相萃取柱和不同洗脫溶劑對(duì)克菌丹保留行為的影響，優(yōu)化了固相萃取凈化方法及樣品提取方法的分析條件。用ＧＣ-ＥＣＤ檢測(cè)，克菌丹在0.05～2.0ｍｇ／Ｌ濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.997。蘋果中4個(gè)濃度克菌丹的加標(biāo)回收率分別在100％～111％之間，ＲＳＤ在3.0％～7.2％和2.8％～4.2％之間?？司さ姆椒z出限分別為0.012ｍｇ/ｋｇ。
儀器與試劑
ＴＲＡＣＥＧＣ2000氣相色譜儀（美國(guó)菲尼根公司），帶有電子捕獲檢測(cè)器（ＥＣＤ）和電子流量控制?ＡＳ2000自動(dòng)進(jìn)樣器；ＶａｒｉａｎＣＰ-Ｓｉｌ8ＣＢ（30ｍ×0.32ｍｍ×0.25μｍ）色譜柱（相當(dāng)于ＤＢ-5）；載氣為氮?dú)猓兌?9.999％）。ＵＬＴＲＡＴＵＲＲＡＸＴ18ｂａｓｉｃ分散機(jī)（廣州儀科實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司）。
正己烷、丙酮、二氯甲烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯均為分析純?使用前用全玻璃蒸餾器重蒸。乙腈為色譜純。Ｖ（丙酮）∶Ｖ（正己烷）＝1∶9混合溶液。Ｖ（正己烷）∶Ｖ（二氯甲烷）∶Ｖ（乙腈）＝50∶49∶1混合液。無水硫酸鈉（分析純）：使用前在500℃馬弗爐中灼燒4ｈ。ＮａＣｌ（分析純）：140℃烘4ｈ。硅鎂吸附劑：（75～150μｍ，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司），在650℃馬弗爐中灼燒3ｈ，再在130℃烘箱中烘干3ｈ，然后加入占總重量10％的水去活，平衡24ｈ后使用。硅膠（75～150μｍ，青島勝?；び邢薰荆?，130℃烘3ｈ，加入占總重量10％的水去活，平衡24ｈ后使用。
樣品處理
準(zhǔn)確稱取25ｇ加工好的勻漿樣品放入100ｍＬ燒杯中，加水15ｍＬ磷酸，乙腈50ｍＬ，在分散機(jī)中勻漿2ｍｉｎ后過濾，濾液全部過濾到裝有5～7ｇＮａＣｌ的100ｍＬ具塞量筒中，收集濾液60～70ｍＬ，蓋上塞子，劇烈振蕩1ｍｉｎ，在室溫下靜置20ｍｉｎ，待乙腈相和水相分層。分層后，準(zhǔn)確吸取10ｍＬ乙腈提取液，置入50ｍＬ燒杯中，將燒杯放在70℃的水浴上加熱，蒸發(fā)近干。在燒杯中加入2．0ｍＬ正己烷溶解樣品，然后將溶液轉(zhuǎn)移到凈化柱中凈化?用5．0ｍＬＶ（正己烷）∶Ｖ（二氯甲烷）∶Ｖ（乙腈）＝50∶49∶1混合溶液洗燒杯，并加到柱中洗脫，再重復(fù)二次，收集所有淋洗液。將淋洗液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至5ｍＬ左右，濃縮溫度72℃，然后用氮?dú)饬鞔蹈?，用環(huán)己烷定容至2．0ｍＬ（或5．0ｍＬ），供氣相色譜分析。
層析柱的制備
在10ｍＬ玻璃注射器內(nèi)放入少許脫脂棉，從下到上依次分別加入0．75ｇ硅鎂吸附劑、0．75ｇ硅膠和約0．5ｇ無水硫酸鈉，敲實(shí)，加5．0ｍＬＶ（丙酮）∶Ｖ（正己烷）＝1∶9混合溶液于玻璃注射器中，潤(rùn)濕吸附柱，用于樣品凈化。
標(biāo)準(zhǔn)樣品的配制
克菌丹：準(zhǔn)確稱取0．0502ｇ克菌丹標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于100ｍＬ燒杯中，用甲醇溶解，溶解后轉(zhuǎn)移到100ｍＬ容量瓶中并稀釋至刻度，濃度為502ｍｇ／Ｌ；
色譜條件
色譜條件如下圖：
圖1 克菌丹含量檢測(cè)色譜條件圖
參考文獻(xiàn)
[1] FAN K，WANG J，F(xiàn)U L，LI X J，ZHANG Y，ZHANG X D，ZHAIH，QU J L. Sensitivity of Botryosphaeria dothidea from apple to te?buconazole in China [J]. Crop Protection，2016，87: 1-5.
參考文獻(xiàn)
[1] FAN K，WANG J，F(xiàn)U L，LI X J，ZHANG Y，ZHANG X D，ZHAIH，QU J L. Sensitivity of Botryosphaeria dothidea from apple to te?buconazole in China [J]. Crop Protection，2016，87: 1-5.