背景[1-3]
THP-1人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞是從一名1歲的患有急性單核細(xì)胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細(xì)胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細(xì)胞，細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)均沒有免疫球蛋白，表達(dá)C3R和FcR；可受佛波酯TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化；可作為轉(zhuǎn)染宿主。
培養(yǎng)條件：RPMI-1640+10%FBS+0.05mM 2-巰基乙醇；溫度：37℃氣相：95%空氣，5%二氧化碳。
THP-1人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞
細(xì)胞傳代：
1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無菌操作臺(tái)，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；
2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對(duì)其進(jìn)行傳代，傳代比例為1:3到1:6；
3.傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為消化時(shí)間，記錄消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化。
用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之完全脫落，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。
應(yīng)用[4][5]
用于白念珠菌誘導(dǎo)人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1細(xì)胞）固有免疫應(yīng)答機(jī)制的初步研究
研究人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1細(xì)胞）對(duì)墨汁、白念珠菌的吞噬情況,初步探討肌動(dòng)蛋白在吞噬過程中的作用。
方法：以丙二醇甲醚醋酸酯（Propylene glycol monomethyl ether acetate,PMA）誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞為巨噬細(xì)胞,分別以適量墨汁、滅活的白念珠菌菌懸液與其進(jìn)行共培養(yǎng),觀察THP-1細(xì)胞吞噬情況。并以細(xì)胞松弛素-B（Cytochalasin-B,Cyt-B）對(duì)THP-1細(xì)胞預(yù)處理后,觀察細(xì)胞對(duì)白念珠菌吞噬情況。
結(jié)果：經(jīng)PMA誘導(dǎo)后的THP-1細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,出現(xiàn)胞對(duì)培養(yǎng)瓶的附著,并有多形性的細(xì)胞形狀。與墨汁、白念珠菌共培養(yǎng)后可見細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量墨汁、白念珠菌成分。經(jīng)Cyt-B預(yù)處理后的細(xì)胞不能吞噬白念珠菌,僅可見少量白念珠菌與細(xì)胞黏附。
結(jié)論：THP-1細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞后具有吞噬功能,白念珠菌可被誘導(dǎo)后的THP-1細(xì)胞吞噬；吞噬過程的發(fā)生依賴肌動(dòng)蛋白的聚集。
參考文獻(xiàn)
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