背景^[1-3]

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基是一種無異源、無血清、成分確定的培養(yǎng)基；專為骨髓（BM-MSC）、脂肪組織(AT-MSC)、臍帶(UC-MSC)等多種來源的人間充質(zhì)干細(xì)胞更好的生長和擴(kuò)增而設(shè)計。

間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基可在保持人間充質(zhì)干細(xì)胞的自我更新和多向分化潛能的同時進(jìn)行長期生長培養(yǎng)。

與其他含血清培養(yǎng)基以及其他商業(yè)無血清培養(yǎng)基相比，人間充質(zhì)干細(xì)胞在間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基中表現(xiàn)出更好的增殖和自我更新的潛力；另外，經(jīng)過長期培養(yǎng)，人間充質(zhì)干細(xì)胞仍能維持其正常的纖維囊狀細(xì)胞形態(tài)，三系分化潛能，并表現(xiàn)正常的hMSC表面標(biāo)記物和核型穩(wěn)定。

 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

使用步驟：

1、人間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基準(zhǔn)備

將間充質(zhì)干細(xì)胞無血清生長添加劑(MSCGs)在2-8℃過夜融化，按1:100比例加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，即成為間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基。

2、人間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇

①從冰箱中取出完全培養(yǎng)基，在生物安全柜或超凈臺中吸取適量（如T-75瓶：10-15mL)完全培養(yǎng)基沿上表面加入間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，切勿沖到細(xì)胞培養(yǎng)瓶底面，即：細(xì)胞生長面。然后慢慢將細(xì)胞培養(yǎng)瓶平放，在37℃、恒溫CO2培養(yǎng)箱中放置5-10分鐘后使用。

②從液氮中取出凍存的間充質(zhì)干細(xì)胞，迅速將凍存管放入37℃水浴中，快速融解。

③用70%-75%酒精消毒凍存管外壁，在生物安全柜或超凈臺中打開凍存管，用吸管/移液器將細(xì)胞凍存懸液緩慢移入裝有5-10mL細(xì)胞完全培養(yǎng)基的15mL離心管中（在這一過程請盡可能避免產(chǎn)生氣泡）。

④1200rpm離心5min，棄上清，加入2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，臺盼藍(lán)染色計數(shù)，按密度2×104cells/cm2將細(xì)胞接種至步驟①中孵育完的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，添加細(xì)胞時，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶豎立，細(xì)胞懸液直接加到底部，切忌沖到細(xì)胞培養(yǎng)瓶底面。

⑤輕輕搖晃細(xì)胞培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞均勻分布，混勻后，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

⑥24h后，更換新鮮的完全培養(yǎng)基（溫育至37℃）。

應(yīng)用^[4][5]

用于脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞體外轉(zhuǎn)分化內(nèi)皮細(xì)胞及鈣調(diào)蛋白拮抗劑W7調(diào)控研究

在無血清培養(yǎng)條件下,將人脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞（hADSCs）分化為內(nèi)皮細(xì)胞,為血管組織工程化種子細(xì)胞的來源和血管新生模型的建立提供基礎(chǔ)。

研究方法：從健康人體抽脂術(shù)獲得的脂肪進(jìn)行hADSCs原代培養(yǎng),用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD45、CD44、CD14、CD29及CD105,并分化至成骨和脂肪細(xì)胞,以免疫組化方法檢測其干細(xì)胞的分化能力；然后用含40ng/ml VEGF和lOng/ml bFGF的無血清分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)hADSCs分化為內(nèi)皮細(xì)胞,在第15、30、50d通過流式細(xì)胞術(shù)檢測vWF和VE-Cadherin兩種特異性抗原表達(dá),并用透射電鏡檢測WP小體以及成血管實驗來檢測是否分化為內(nèi)皮細(xì)胞。

參考文獻(xiàn)

[1]Calcium regulates ERK signaling by modulating its protein-protein interactions[J].Dana Chuderland,Rony Seger.Communicative&Integrative Biology.2008(1)

[2]Adipose-derived stem cells:Isolation,expansion and differentiation[J].Bruce A.Bunnell,Mette Flaat,Christine Gagliardi,Bindiya Patel,Cynthia Ripoll.Methods.2008(2)

[3]Role of sarco/endoplasmic reticulum calcium content and calcium ATPase activity in the control of cell growth and proliferation[J].Larissa Lipskaia,Jean-Sébastien Hulot,Anne-Marie Lompré.Pflügers Archiv-European Journal of Physiology.2008(3)

[4]A novel collagen-binding peptide promotes osteogenic differentiation via Ca 2+/calmodulin-dependent protein kinase II/ERK/AP-1 signaling pathway in human bone marrow-derived mesenchymal stem cells[J].Min Kyoung Shin,Mi-Kyoung Kim,Yoe-Sik Bae,Inho Jo,Seung-Jin Lee,Chong-Pyoung Chung,Yoon-Jeong Park,Do Sik Min.Cellular Signalling.2007(4)

[5]翟羽佳.脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞體外轉(zhuǎn)分化內(nèi)皮細(xì)胞及鈣調(diào)蛋白拮抗劑W7調(diào)控研究[D].北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,2011.