背景[1-3]
雞腫瘤壞死因子Α(TNF-Α)ELISA KIT應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。
用純化的雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入腫瘤壞死因子α(TNF-α),再與HRP標(biāo)記的TNF-α抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。
雞腫瘤壞死因子Α(TNF-Α)ELISA KIT
TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度。
操作步驟：
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
應(yīng)用[4][5]
用于急性冠脈綜合征患者TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL血清含量變化及臨床意義研究
探討急性冠脈綜合征患者血清TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL的含量的變化及臨床意義。方法：選擇經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影患者63例,男37例、女26例,分為急性心肌梗塞組（AMI）,不穩(wěn)定型心絞痛組（UAP）及正常對(duì)照組。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）,檢測TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL血清水平,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
結(jié)果1.AMI組TNF-α血清水平與UAP組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,AMI組與對(duì)照組相比血清TNF-α濃度顯著增加（P<0.05）,UAP組與對(duì)照組相比血清TNF-α濃度顯著增加（P<0.05）。
2. UAP組血清IFN-γ與AMI組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,AMI組與對(duì)照組相比血清INF-γ濃度顯著增加（P<0.05）,UAP組與對(duì)照組相比血清INF-γ濃度顯著增加（P<0.05）。
3. AMI組與UAP相比MMP-9血清濃度增加（P<0.05）,AMI組與對(duì)照組相比血清MMP-9濃度顯著增加（P<0.05）,UAP組與對(duì)照組相比血清MMP-9血清濃度顯著增加（P<0.05）。
4. UAP組血清oxLDL濃度與AMI組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,AMI組與對(duì)照組相比血清oxLDL濃度顯著增加（P<0.05）,UAP組與對(duì)照組相比血清oxLDL濃度顯著增加（P<0.05）。
結(jié)論1.急性冠脈綜合征患者TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL血清水平呈顯著正相關(guān)。
2. TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL血清水平可作為判斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性的指標(biāo)。
3.血清MMP-9水平增高提示斑塊不穩(wěn)定性,同時(shí)也可以作為冠心病患者危險(xiǎn)分層的一個(gè)重要生化監(jiān)測指標(biāo)。
參考文獻(xiàn)
[1]Aspirin inhibits MMP-2 and MMP-9expressions and activities through upregulation of PPARalpha/gamma andTIMP gene expressions in ox-LDL-stimulated macrophages derived fromhuman monocytes.Hua Y,Xue J,Sun F,Zhu L,Xie M.Pharmacology.2009
[2]Statins control oxidized LDL-mediated histone modifications and gene expression in cultured human endothelial cells.P Dje N’Guessan,F Riediger,K Vardarova,S Scharf,J Eitel,B Opitz,H Slevogt,W Weichert,AC Hocke,B Schmeck,N Suttorp,S Hippenstiel.Arteriosclerosis and Thrombosis.2009
[3]Smoking and low serum testosterone associates with high concentration of oxidized LDL.Linna,Meri S,Ahotupa,et al.Annals of Medicine.2008
[4]Exogenous interferongamma enhances atherosclerosis in apolipoprotein E-/-mice.Whitman S C,Ravisankar P,Elam H,et al.American Journal of Pathology.2000
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