背景[1-3]
多克隆抗體制備是由異源抗原（大分子抗原、半抗原偶聯物）刺激機體產生免疫反應，有機體漿細胞分泌的一組免疫球蛋白的過程。多克隆抗體由于其可識別多個抗原表位、可引起沉淀反應，制備時間短，成本低的原因廣泛應用于研究和診斷方面。
抗原通常是由多個抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機體，由一個B淋巴細胞接受該抗原刺激所產生的抗體稱之為單克隆抗體（MonoclonalAntibody）。
由多種抗原決定簇刺激機體，相應地就產生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機體內所產生的抗體就是多克隆抗體；除了抗原決定簇的多樣性以外，同樣一種抗原決定簇，也可刺激機體產生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。
抗原刺激機體，產生免疫學反應，由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結合能力的一組球蛋白，這就是免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結合能力的免疫球蛋白就是抗體。
多克隆抗體制備
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟：
1、制備抗原。
2、選擇實驗動物。
3、動物免疫。
4、試取血進行測試，看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫，殺死實驗動物，采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。
應用[4][5]
用于豬ISG43和ISG60蛋白的原核表達及多克隆抗體制備
克隆了ISG60和ISG43基因,將這些基因連接到pMD18-T載體,測序正確后再用Xho I和BamH I雙酶切法插入PET-32a（+）克隆位點,成功構建了PET-ISG60和PET-ISG43重組原核表達質粒。將重組質粒轉化Rosetta（DE3）衍生菌并用不同濃度的IPTG進行誘導,經SDS-PAGE和Western-Blot分析顯示,ISG43在0.5 mM IPTG誘導下表達,ISG60在0.05mMIPTG誘導下表達,ISG43和ISG60兩者的重組蛋白都能以包涵體和可溶性蛋白兩種形式進行表達。
通過可溶性蛋白形式純化蛋白獲得有活性的免疫原,以純化的ISG43和ISG60重組活性蛋白作為抗原與弗式佐劑一起免疫小鼠。經過四次免疫后獲得了反應性和特異性較高的多克隆抗體。
用Western Blot檢測,產生的抗體能與原核表達蛋白發(fā)生反應,又能與PK-15細胞中經PolyI:C誘導產生的相應蛋白顯示良好反應性。
抗體在稀釋比例為1:2000、1:4000、1:8000情況下都能與原核表達蛋白發(fā)生特異性反應。同樣,抗體在稀釋比例為1:600和1:1200時也能與PK-15細胞中表達的相應蛋白發(fā)生反應。
參考文獻
[1]Screening of cellular proteins that interact with the classical swine fever virus non-structural protein 5A by yeast two-hybrid analysis[J].Chengcheng Zhang,Lei He,Kai Kang,Heng Chen,Lei Xu,Yanming Zhang.Journal of Biosciences.2014(1)
[2]Usp18 Driven Enforced Viral Replication in Dendritic Cells Contributes to Break of Immunological Tolerance in Autoimmune Diabetes[J].Nadine Honke,Namir Shaabani,Dong-Er Zhang,George Iliakis,Haifeng C.Xu,Dieter H?ussinger,Mike Recher,Max L?hning,Philipp A.Lang,Karl S.Lang.PLOS Pathogens.2013(10)
[3]Usp18 deficient mammary epithelial cells create an antitumour environment driven by hypersensitivity to IFN‐λand elevated secretion of Cxcl10[J].Christoph Burkart,Kei‐ichiro Arimoto,Tingdong Tang,Xiuli Cong,Nengming Xiao,Yun‐Cai Liu,Sergei V.Kotenko,Lesley G.Ellies,Dong‐Er Zhang.EMBO Mol Med.2013(7)
[4]Ubiquitin specific protease 18（Usp18）is a WT1 transcriptional target[J].Mohammad Shahidul Makki,E.Cristy Ruteshouser,Vicki Huff.Experimental Cell Research.2013(5)
[5]姜炳星.豬ISG43和ISG60蛋白的原核表達及多克隆抗體制備[D].廣西大學,2017.