背景^[1-3]

細(xì)菌基因組DNA快速提取試劑盒(帶蛋白酶K)用于細(xì)菌基因組DNA的小量提取。其純化原理是利用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞釋放基因組DNA，由硅膠膜柱可逆吸附基因組DNA，經(jīng)蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)后，用純化液洗脫獲得基因組DNA。本產(chǎn)品可從0.5-2 ml對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌液（不超過(guò)106–108個(gè)）中提取到3-20μg超純基因組DNA（OD260/280=1.7-1.9），此基因組DNA可直接用于酶切、PCR等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

細(xì)菌DNA瓊脂糖膠圖

操作方法

1取0.5-2 ml處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌液，置于1.5 ml離心管中。12,000 rpm離心1min，棄上清。

2向收集到的菌體沉淀中加入200μl緩沖液DS，用漩渦振蕩器劇烈振蕩直至菌體徹底懸浮。

3加入20μl蛋白酶K溶液，混勻。

4加入220μl裂解液MS，漩渦振蕩混勻，直至形成均一的懸浮液。65℃溫浴10min。溶液應(yīng)變清亮，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

5加入220μl無(wú)水乙醇，上下顛倒混勻。此時(shí)可能出現(xiàn)絮狀沉淀，將溶液及絮狀沉淀轉(zhuǎn)移到純化柱中。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

6加入500μl去蛋白液PS。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

7加入500μl漂洗液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

8加入500μl漂洗液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

9 12,000 rpm離心3min，以徹底去除純化柱中殘留的液體。

10將純化柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處，懸空加入30-100μl洗脫液TE。室溫放置2min。于12,000 rpm離心2min，管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。

應(yīng)用^[4][5]

用于金磁微粒純化細(xì)菌基因組DNA方法的研究

磁性復(fù)合粒子特有的超順磁性使其在外加磁場(chǎng)中反復(fù)操作而不聚集,較大的比表面積又保證了生物分子在其表面的固定化容量,與傳統(tǒng)的液相和離心柱式固相純化核酸純化方法相比,基于磁性復(fù)合微粒的核酸純化法具有更多的優(yōu)勢(shì),如純化過(guò)程簡(jiǎn)便快速、無(wú)需離心操作、不涉及有毒污染試劑,可適于大規(guī)模自動(dòng)化工作站使用等,將成為未來(lái)核酸純化的主導(dǎo)發(fā)展方向。

以金磁微粒（GoldMag（R）particles）為載體,對(duì)細(xì)菌基因組DNA的純化方法進(jìn)行了探討。采用簡(jiǎn)單的氯化鈉／乙醇結(jié)合體系,建立了從革蘭氏陰性菌中純化基因組DNA的方法。

分別以大腸桿菌和銅綠假單胞菌為樣本,對(duì)純化方法進(jìn)行評(píng)價(jià)；并將該法與商品化試劑盒進(jìn)行比較,純化得到的基因組DNA可成功用于PCR擴(kuò)增等下游應(yīng)用。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：該方法可從500μl大腸桿菌培養(yǎng)液（OD600=3.0）中純化得到約20μg的基因組DNA,產(chǎn)率約是商品化試劑盒TIANamp Bacteria DNA Kit的3倍,其OD260/OD280比值在1.7-1.9之間,能夠滿足下游PCR反應(yīng)的要求。

以DNA產(chǎn)率為指標(biāo),純化大腸桿菌基因組DNA的平均批內(nèi)差為3.98%、批間差為8.41%,純化銅綠假單胞菌基因組DNA的平均批內(nèi)差為7.32%、批間差為10.67%。方法具有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。

以枯草芽孢桿菌為樣本,初步探索了從革蘭氏陽(yáng)性菌中純化基因組DNA的方法,對(duì)溶菌酶用量、RNase用量和樣本處理方式進(jìn)行了優(yōu)化,結(jié)果表明：方法可從500μl枯草芽孢桿菌培養(yǎng)液（OD600=3.0）中純化得到2-4μg的基因組DNA,其OD260/OD280比值在1.7-1.9之間,并能滿足下游PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增要求。

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